Table 2. TM2 and 3 sequences and Kyte–Doolittle (KD) values of TM2 and TM3 mutants.

Construct*	TM2 sequence amino acids 437–458†	TM3 sequence amino acids 459–481†	Average KD of TM2‡	Average KD of TM3‡
AE1	VSELLISTAVQGILFALLGAQP	LLVVGFSGPLLVFEEAFFSFCET	1.34	1.34
AE1 N642D	Unaltered	Unaltered	1.34	1.34
AE1 N431	Unaltered	Unaltered	1.34	1.34
AE1 N432	Unaltered	Unaltered	1.34	1.34
AE1 N433	Unaltered	Unaltered	1.34	1.34
AE1 N434	Unaltered	Unaltered	1.34	1.34
AE1 N435	TSELLISTAVQGILFALLGAQP	LLVVGFSGPLLVFEEAFFSFCET	1.11	1.34
AE1 N436	Unaltered	Unaltered	1.34	1.34
AE1 N437	NSTLLISTAVQGILFALLGAQP	LLVVGFSGPLLVFEEAFFSFCET	1.11	1.34
AE1 N437/I449T	NSTLLISTAVQGTLFALLGAQP	LLVVGFSGPLLVFEEAFFSFCET	0.87	1.34
AE1 N438	VNGSLISTAVQGILFALLGAQP	LLVVGFSGPLLVFEEAFFSFCET	1.14	1.34
AE1 N438/I449T	VNGSLISTAVQGTLFALLGAQP	LLVVGFSGPLLVFEEAFFSFCET	0.9	1.34
AE1 N441	VSELNISTAVQGILFALLGAQP	LLVVGFSGPLLVFEEAFFSFCET	1.00	1.34
AE1 N442	VSELLNSTAVQGILFALLGAQP	LLVVGFSGPLLVFEEAFFSFCET	0.97	1.34
AE1 N443	VSELLINTTVQGILFALLGAQP	LLVVGFSGPLLVFEEAFFSFCET	1.1	1.34
AE1 N444	VSELLISNATQGILFALLGAQP	LLVVGFSGPLLVFEEAFFSFCET	0.99	1.34
AE1 N446	VSELLISTANQSILFALLGAQP	LLVVGFSGPLLVFEEAFFSFCET	0.97	1.34
AE1 N453	VSELLISTAVQGILFANLSAQP	LLVVGFSGPLLVFEEAFFSFCET	0.99	1.34
AE1 N454	VSELLISTAVQGILFALNGSQP	LLVVGFSGPLLVFEEAFFSFCET	0.89	1.34
AE1 N455	VSELLISTAVQGILFALLNASP	LLVVGFSGPLLVFEEAFFSFCET	1.32	1.34
AE1 N455, P458A	VSELLISTAVQGILFALLNASA	LLVVGFSGPLLVFEEAFFSFCET	1.47	1.34
AE1 N456	VSELLISTAVQGILFALLGNQS	LLVVGFSGPLLVFEEAFFSFCET	1.13	1.34
AE1 N457	VSELLISTAVQGILFALLGANA	SLVVGFSGPLLVFEEAFFSFCET	1.49	1.14
AE1 N463	VSELLISTAVQGILFALLGAQP	LLVVNSSGPLLVFEEAFFSFCET	1.34	1.05
AE1 N464	VSELLISTAVQGILFALLGAQP	LLVVGNSSALLVFEEAFFSFCET	1.34	1.2
AE1 N465	VSELLISTAVQGILFALLGAQP	LLVVGFNGSLLVFEEAFFSFCET	1.34	1.26
AE1 N466	VSELLISTAVQGILFALLGAQP	LLVVGFSNATLVFEEAFFSFCET	1.34	1.16
AE1 N467	VSELLISTAVQGILFALLGAQP	LLVVGFSGNLTVFEEAFFSFCET	1.34	1.06
AE1 N468	VSELLISTAVQGILFALLGAQP	LLVVGFSGPNLTFEEAFFSFCET	1.34	0.83
AE1 N469	VSELLISTAVQGILFALLGAQP	LLVVGFSGPLNVSTEAFFSFCET	1.34	0.99
AE1 N470	VSELLISTAVQGILFALLGAQP	LLVVGFSGPLLNSTEAFFSFCET	1.34	0.97
AE1 N471	VSELLISTAVQGILFALLGAQP	LLVVGFSGPLLVNGTAFFSFCET	1.34	1.33
AE1 N472	VSELLISTAVQGILFALLGAQP	LLVVGFSGPLLVFNGTFFSFCET	1.34	1.37
AE1 N472/V470T	VSELLISTAVQGILFALLGAQP	LLVVGFSGPLLTFNGTFFSFCET	1.34	1.16
AE1 N473	VSELLISTAVQGILFALLGAQP	LLVVGFSGPLLVFENASFSFCET	1.34	1.25
AE1 N473/V470T	VSELLISTAVQGILFALLGAQP	LLVVGFSGPLLTFENASFSFCET	1.34	1.04
AE1 N474	VSELLISTAVQGILFALLGAQP	LLVVGFSGPLLVFEENSSSFCET	1.34	0.8
AE1 N475	VSELLISTAVQGILFALLGAQP	LLVVGFSGPLLVFEEANSSFCET	1.34	0.91
AE1 N476	VSELLISTAVQGILFALLGAQP	LLVVGFSGPLLVFEEAFNSSCET	1.34	0.91
AE1 N477	VSELLISTAVQGILFALLGAQP	LLVVGFSGPLLVFEEAFFNSSET	1.34	0.93
AE1 N478	VSELLISTAVQGILFALLGAQP	LLVVGFSGPLLVFEEAFFSNCTT	1.34	1.19
AE1 N479	VSELLISTAVQGILFALLGAQP	LLVVGFSGPLLVFEEAFFSFNGT	1.34	1.22
AE1 N482	Unaltered	Unaltered	1.34	1.34
AE1 N487	Unaltered	Unaltered	1.34	1.34

* Constructs refer to the name given each mutant in the paper.

† Mutated sites are in bold.

‡ Altered Kyte–Doolittle scores are in bold.