Table 2. Kinetic analysis of single-nucleotide incorporation by Therminator DNA polymerase a.
XYb | NTP | Km (µM) | k cat (s−1) | k cat/Km (s−1 M−1) |
TG | dATP | 0.59±0.11 | 3.7±0.5 | 6.2×106 |
CA | dGTP | 0.47±0.27 | 2.0±0.3 | 4.3×106 |
AG | TTP | 0.67±0.14 | 4.2±0.4 | 6.4×106 |
DG | TTP | 0.35±0.10 | 6.8±0.6 | 1.9×107 |
GA | dCTP | 0.32±0.17 | 3.2±0.8 | 1.0×107 |
TG | gATP | 14.0±6.7 | 4.7±0.8 | 3.4×105 |
CA | gGTP | 10.6±4.7 | 2.3±0.1 | 2.1×105 |
AG | gTTP | 129.4±77.3 | 0.8±0.3 | 5.8×103 |
DG | gTTP | 54.3±8.3 | 1.6±0.4 | 3.0×104 |
AG | gUpropTP | 139.5±14.5 | 1.5±0.3 | 1.1×104 |
DG | gUpropTP | 41.4±4.7 | 1.7±0.2 | 4.1×104 |
GA | gCTP | 89.5±38.6 | 1.3±0.6 | 1.4×104 |
GA | gCpropTP | 3.3±0.4 | 1.9±0.2 | 5.8×105 |
Sequences of the primer and the template:
Primer: 5′-TAA TAC GAC TCA CTA TAGGG-3′.
Template: 3′-ATT ATG CTG AGT GAT ATC CC XY ACA TCT ATC-5′.
D denotes 2,6-diaminopurine-2′-deoxyribonucleotide.