Table 1. Kinetic parameters for human wild-type and nucleotide-binding mutant variants of c-NADP-ME.
c-NADP-ME | K m,NADP (mM) | Fold increase K m(NADP) | K m,mal(NADP) (mM) | Fold increase K m,mal(NADP) | k cat,NADP (s−1) | k cat,NADP ratio relative to WT | K m,NAD (mM) | Fold decrease K m(NAD) | K m,mal(NAD) (mM) | Fold decrease K m,mal(NAD) | k cat,NAD (s−1) | k cat,NAD ratio relative to WT |
WT | 0.005±0.001 | 1 | 0.9±0.01 | 1 | 146±4 | 1 | 19±4 | 1 | 5±0.5 | 1 | 51±5 | 1 |
E314A | 0.002±0.0004 | 0.4 | 0.4±0.1 | 0.4 | 110±2 | 0.75 | 1.6±0.3 | 12 | 4±0.8 | 1 | 113±5 | 2.2 |
S346K | 0.013±0.001 | 2.6 | 0.8±0.1 | 0.9 | 129±3 | 0.88 | 17±2 | 1.1 | 4±0.2 | 1.1 | 22±1 | 0.4 |
E314A/S346K | 0.003±0.0003 | 0.58 | 1±0.1 | 1.2 | 137±2 | 0.94 | 5±0.7 | 3.6 | 4±0.3 | 1.1 | 145±7 | 2.8 |
K347Y | 0.03±0.001 | 5.4 | 2±0.1 | 1.8 | 121±2 | 0.83 | 11±3 | 1.7 | 5±0.3 | 0.9 | 40±4 | 0.8 |
K362Q | 0.7±0.1 | 144 | 2±0.1 | 1.8 | 132±3 | 0.90 | 13±2 | 1.5 | 5±0.3 | 1.0 | 60±4 | 1.2 |
K362H | 0.3±0.02 | 58. | 4±0.3 | 4.9 | 149±2 | 1.02 | 14±2 | 1.4 | 8±0.3 | 0.6 | 108±7 | 2.1 |
S346K/K347Y | 0.14±0.02 | 28 | 1±0.1 | 1.0 | 102±2 | 0.70 | 18±1 | 1.1 | 5±0.3 | 0.9 | 65±2 | 1.3 |
S346K/K362Q | 6±0.5 | 1194 | 3±0.3 | 3.7 | 112±3 | 0.77 | 14±2 | 1.4 | 4±0.3 | 1.3 | 110±5 | 2.2 |
K347Y/K362Q | 12±0.5 | 2400 | 5±0.1 | 5.5 | 78±2 | 0.53 | 20±2 | 1 | 8±0.4 | 1 | 53±2 | 1.0 |
S346K/K347Y/K362Q | 17±2 | 3400 | 9±1 | 10 | 15±1 | 0.10 | 10±1 | 1.9 | 4±0.1 | 1.4 | 124±5 | 2.4 |
E314A/S346K/K347Y/K362Q | 5±1.5 | 900 | 5±0.7 | 5.6 | 51±8 | 0.35 | 1.5±0.2 | 13 | 2±0.3 | 3 | 208±6 | 4.1 |
S346K/K347Y/K362H | 29±7 | 5700 | 10±3 | 11 | 8±1.2 | 0.05 | 7.1±0.7 | 2.7 | 6±0.8 | 0.9 | 219±9 | 4.3 |
E314A/S346K/K347Y/K362H | 3±0.5 | 620 | 7±0.3 | 7.3 | 26±1 | 0.18 | 0.9±0.2 | 21 | 1±0.2 | 4 | 258±2 | 5.1 |
S346I/K347D/K362H | 116±102 | 23260 | 32±5 | 36 | 1.3±0.1 | 0.01 | 6.5±0.8 | 2.9 | 7±0.8 | 0.8 | 131±8 | 2.6 |
E314A/S346I/K347D/K362H | 29±10 | 5806 | 21±3 | 24 | 15±3 | 0.10 | 0.9±0.1 | 21 | 3±0.5 | 2 | 166±5 | 3.3 |