Table 1.

Oligonucleotide primers used to construct VirB6 cysteine substitution mutations

Mutation	5′ primer	3′ primer
I12C	5′-GCCGTTTACGGCATGCCATACGATCTTCGATG-3′	5′-AAGATCGTATGGCATGCCGTAAACGG-3′
D25C	5′-CTTCACGACAGGCCTCTGCAGGATGCTTGAG-3′	5′-GTCTCAAGCATCCTGCAGAGGCCTGTC-3′
R62C	5′-GAAGTCGATACCTGCAGCGGTATCACTCG-3′	5′-GTGATACCGCTGCAGGTATCGACTTC-3′
T66C	5′-CCCGAGCGGTATCTGCAGGGTGATCACGGTC-3′	5′-GTGATCACCCTGCAGATACCGCTGCG-3′
Q116C	5′-GACTGTTCCGGCATGCTTGGATACAATTTTCG-3′	5′-AATTGTATCCAAGCATGCCGGAACAGT-3′
S133C	5′-CAGAAAATCGCATGCGAAATCGGTCCG-3′	5′-CGGACCGATTTCGCATGCGATTTTCTG-3′
D188C	5′-GGATATATTTTCTGCAGGACGCGGGACATC-3′	5′-GATGTCCCGCGTCCTGCAGAAAATATATC-3′
T224C	5′-CCTAACCGAAGCATGCGCGCTCACCCTC-3′	5′-GAGGGTGAGCGCGCATGCTTCGGTTAGG-3′
L263C	5′-CGCTCATTGTCGCATGCCCGGCAATCGCCGGC-3′	5′-GGCGATTGCCGGGCATGCGACAATGAGC-3′
Q291C	5′-ACCGTCGCTTCGCATGCGTTGAACGGGGCTAG-3′	5′-GCCCCGTTCAACGCATGCGAAGCGACG-3′

Restriction sites SphI (GCATGC) and PstI (CTGCAG) in bold; Cys codon (TGC) underlined.