Table 2.

Real-time quantitative RT-PCR cycling conditions for amplification of canine cytokine mRNAs and CRCoV nucleoprotein RNA.

	Canine TNF-α			Canine IL-6			Canine IL-8			CRCoV nucleoprotein
	Temp. (°C)	Time	Cycles	Temp. (°C)	Time	Cycles	Temp. (°C)	Time	Cycles	Temp. (°C)	Time	Cycles
Initial denaturation	95	15 min	1	95	15 min	1	95	15 min	1	95	10 min	1
Denaturation	95	10 s	40	95	10 s	40	95	10 s	40	95	10 s	40
Annealing	62.5	15 s		60	15 s		60	15 s		53	20 s
Extension	72	30 s		72	30 s		72	30 s		72	30 s
Non-specific product melt	79.5	15 s		80	10 s		75	10 s		79	10 s
Final annealing	72	5 min	1	72	5 min	1	72	5 min	1	72	5 min	1
Melting curve	70–90	0.2 °C s−1	1	70–90	0.2 °C s−1	1	70–90	0.2 °C s−1	1	65–95	0.2 °C s−1	1
Re-annealing	72	5 min	1	72	5 min	1	72	5 min	1	72	5 min	1