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AAV介导的DMD基因转导技术难题研究进展

技术难点	解决方案	实验进展	对研究者的建议
注：*示人类所有细胞中均存在的表面标记CD47，可与巨噬细胞上的信号调节蛋白α相互作用，阻止它摄取自身细胞，若将CD47插入到AAV衣壳中，则有望减少巨噬细胞摄取而降低免疫应答。
AAV承载能力	（1）导入截短mini-dystrophin基因	mdx鼠和DMD犬等30多项动物实验证实有效[12]，但截短后的dystrophin缺少nNOS等部位而不能完全治愈DMD患者	可将AAV衣壳修饰和双载体技术相结合，或许能在兼顾转导效能情况下解决载量问题。
	（2）运用双载体承载更完整基因	DMD犬中获得成功[13]，但仍不能导入全长dystrophin cDNA
	（3）运用三载体承载全长基因	mdx鼠肌肉中表达全长dystrophin蛋白，但转导效能极低[8]
	（4）经AAV衣壳修饰增加载量	rAAV2/HBoV1嵌合载体承载能力增大[14]
免疫应答	（1）使用免疫抑制剂	mdx鼠和犬模型中基因表达的持续时间更长[15]
	（2）诱导口服免疫耐受	在胎儿期犬的羊水内注入载有micro-dystrophin的rAAV成功诱导口服免疫耐受，但由于DMD早期产前筛查和诊断体系尚不完善，该法运用于人体仍存局限性[16]	应完善DMD早期产前筛查和诊断体系
	（3）衣壳修饰技术	AAV衣壳表面用苯丙氨酸（F）残基替换暴露的酪氨酸（Y）残基，在mdx鼠和犬模型中减轻免疫反应[14]	Nance等[14]认为将CD47插入到AAV衣壳中，可避免免疫应答*
	（4）通过提升目的基因表达效能而减少递送所需载体量而减轻免疫应答	运用AAV承载表达效能增至原先8~12倍的突变Ⅸ-R338L基因治疗血友病B，临床试验患者出血发生率降低了96%，凝血因子输注量减少了99%[17]	建议经启动子选择[18]、基因合理剪裁和制造突变位点等来提升DMD基因表达效能