Cuadro 4. Comparación de las recomendaciones de MISEV 2014 y de MISEV 2018.

	Principales recomendaciones de MISEV 2014	Actualización en 2018
Aislamiento / purificación de VE	No existe un único método de aislamiento óptimo, así que elija en función de las aplicaciones posteriores y la pregunta científica.	Alta recuperación, baja especificidad: estuches de precipitación basados en polímeros, filtros de centrífuga con cut-off de bajo peso molecular sin pasos adicionales de separación, y ultracentrifugación de alta velocidad sin pasos adicionales de separación Recuperación intermedia, especificidad intermedia: ultracentrifugación diferencial con tiempos y velocidades intermedios incluyendo o no pasos de lavado, cromatografía de exclusión por tamaño, filtros de centrífuga de alto peso molecular como paso inicial, columnas de afinidad de membrana y filtración de flujo tangencial Baja recuperación, alta especificidad: filtración, gradiente de densidad, afinidad
	Informe todos los detalles de los métodos para permitir la reproducibilidad.	Depositar los detalles experimentales con EV-TRACK. Esta base de conocimientos facilita la presentación de informes sobre métodos.
		Algunos protocolos, incluidos los asociados con estuches comerciales, pueden generar poblaciones de VE unidas o mezcladas con los componentes introducidos. Al realizar experimentos funcionales, incluir controles de procedimiento y aumentar la separación de las VE
Caracterización de VE	Caracterización general. Mostrar:	a) Mínimo tres marcadores proteicos positivos de VE, incluido al menos uno transmembrana /proteína unida a lípidos, y una proteína citosólica b) Al menos un marcador de proteína negativo	Categorías adicionales de proteínas por considerar para la caracterización: a) marcadores proteicos positivos de VE, asociados a la membrana y al citosol b) marcadores proteicos negativos (control de pureza) c) marcadores específicos de un subtipo de VE d) proteínas extracelulares solubles con actividad funcional
	Caracterizacion de vesiculas individuales. Utilice dos técnicas diferentes y complementarias, como:	a) microscopia electronica o de barrido por sonda (mostrar tanto campo amplio como cercano) b) seguimiento de partículas individuales
			Describir cuantitativamente tanto la fuente como la preparación de VE
			Análisis topológico de los componentes asociados con las VE, al menos para aquellos con una función dada asociada con VE
Actividad biológica asociada a VE	Debería incluir: a) Estudios de dosis-respuesta		Adicional: comparación cuantitativa de la actividad del medio condicionado o biofluido 1) antes, 2) después de la eliminación de las VE, y 3) de las VE en sí, teniendo en cuenta que la fracción de VE puede incluir materiales aislados concomitantemente o contaminantes. Control sugerido adicional: comparación cuantitativa de la actividad de los subtipos de VE deseados contra los "descartados"
		b) Controles negativos o background del proceso para descartar la influencia de los componentes del suero u otros posibles contaminantes		Para los biofluidos, controles negativos de las funciones asociadas con la enfermedad = fluidos de donantes sanos, sin tratar o de otro tipo adecuado
		c) Controles para evaluar la influencia de componentes solubles o macromoleculares no-VE * c-i) Gradientes de densidad u otro método para mostrar que la actividad es intrínseca a la VE, no solo asociada c-ii) Remoción de VE para reducir la actividad c-iii) Marcación de VE o celular (ej.: marcado fluorescente, con interpretación cuidadosa)		Realizar ensayos funcionales después de separaciones rigurosas, comparando las fracciones VE y no VE para identificar qué proporción de actividad está asociada con cada fracción (en caso de que no sean VE)

^* Una de estas opciones ^7,14