PCR reagents	Final concentration	Amount
Ultrapure H2O		33 μL
10 × buffer	1 ×	5 μL
2 mM dNTPs Mix	0.3 mM	5 μL
25 mM MgSO4	1.5 mM	3 μL
T7-sgRNA forward primer (10 μM)	0.3 μM	1.5 μL
T7-sgRNA reverse primer (10 μM)	0.3 μM	1.5 μL
KOD-Plus-Neo (1.0 U/μL)	1.0 U/50 μL	1 μL
Total		50 μL