Abstract
目的
孤独症是一种病因未明的神经发育性疾病，患者临床异质性过高是目前孤独症病因研究面临的主要问题之一。本研究根据儿童孤独症患者语言发育情况建立分类模型，利用其降低异质性，探讨孤独症患者语言发育与RELN信号通路基因(RELN、VLDLR、LRP8、DAB1、CDK5、FYN)单核苷酸多态性的关系。
方法
本研究病例组儿童招募自湖南、山东、河南三省共5个医疗及自闭症培训机构，依据招募先后分为两部分(第1部分为训练样本，招募时间为2006年10月至2011年5月，第2部分为验证样本，招募时间为2011年7月至2012年5月)。将孤独症患者语言发育进程里程碑指标中“能够说第1个字的年龄”(X 1)和“从能够说第1个字到第1个词组之间的时间”(X 2)作为参数，应用两步聚类法对训练样本的374例孤独症患者进行聚类分析，根据聚类结果建立Bayes判别方程，而后使用该方程对验证样本的310例孤独症患者进行语言发育亚组划分，分析RELN通路上相关基因单核苷酸多态性与各亚组之间的关系。
结果
聚类分析将第1部分374例样本分为3类，第1类患者X 1为(11.83±4.37)个月，X 2为(24.55±8.67)个月；第2类患者X 1为(12.17±3.46)个月，X 2为(7.07±3.79)个月；第3类患者X 1为(30.94±7.60)个月，X 2为(4.73±4.80)个月。依据聚类结果建立相应的判别方程：Y A=-14.442+0.525X 1+0.810X 2；Y B=-4.964+0.477X 1+0.264X 2；Y C= -19.843+1.175X 1+0.241X 2。交叉核实法显示方程误判概率为3.8%。在对验证样本进行亚组划分前，纳入分析的341个单核苷酸多态性位点等位基因频率均未通过校正后的检验水准(P>2.44×10-5)；而亚组划分后，第2类患者LRP8基因rs1288502位点等位基因频率在病例组与对照组间差异有统计学意义(P=6.45×10-6)。
结论
通过孤独症患者语言发育情况建立的判别方程在分析RELN信号通路基因与孤独症的关系时有助于降低样本异质性，且RELN信号通路相关基因中LRP8基因与孤独症患者特定类型的语言发育相关。
Keywords: 孤独症, RELN信号通路, 聚类分析, 判别分析, 单核苷酸多态性
Abstract
Objective
Autism is a neurodevelopment disorder with unclear etiology. High heterogeneity is one of the main issues in the etiological studies. This study explores the relationship between RELN signaling pathway related genes (RELN, VLDLR, LRP8, DAB1, CDK5, FYN) and language development of autism patients based on a cluster analysis model which is established to reduce the heterogeneity.
Methods
Autism children were recruited from 5 different medical/autism training institutes from Hunan, Shandong, and Henan provinces, and were divided into 2 parts according to the recruitment time: The first part was the training sample, which was recruited from October 2006 to May 2011, and the second part was the validation sample, which was recruited from July 2011 to May 2012. A two-step cluster analysis was performed to cluster 374 Chinese Han autism patients into different subgroups based on 2 parameters: Onset age of the first word and interval from the first word to the first phase. A Bayes discriminatory equation was established followed the cluster results. Then we used this equation to divide another 310 autism children into prior defined subgroups. After the genotyping data was screened, a single marker case-control association study was conducted.
Results
The cluster analysis clustered 374 samples into 3 subgroups. Onset ages of the first word in the Group A were (11.83±4.37) months and intervals from the first word to the first phase were (24.55±8.67) months; onset ages of the first word in the Group B were (12.17±3.46) months, intervals from the first word to the first phase were (7.07±3.79) months; onset ages of the first word of Group C were (30.94±7.60) months, intervals from the first word to the first phase were (4.73±4.80) months. The established equations based on the cluster analysis were YA=-14.442+0.525X1+0.810X2, YB=-4.964+0.477X1+0.264X2, YC=-19.843+1.175X1+0.241X2. Cross validated analysis showed that the false rate of the equation was 3.8%. A total of 341 single nucleotide polymorphism (SNP) in 6 genes passed the quality control. Before divided subgroups, none of these SNPs reached the significant P value (P>2.44×10-5, Bonferroni adjustment). However the result showed that rs1288502 of LRP8 in Group B was significantly different from the control group (P=6.45×10-6).
Conclusion
Based on the cluster analysis of language development, we could establish a discriminatory equation to reduce heterogeneity of autism sample. The association test indicates that LRP8 gene in RELN signaling pathway is related to a particular type of language development of autism patients.
Keywords: autism, RELN signaling pathway, cluster analysis, discrimination analysis, single-nucleotide polymorphism
孤独症(autism)是一种以社会交往障碍、兴趣狭窄和重复刻板的行为模式为主要特征的神经发育性疾病，孤独症发病率有逐年上升的趋势[1]，给社会及患者家庭带来了严重的负担。
该病的病因及发病机制至今未明。RELN信号通路可能与孤独症的发病过程相关[2]，该通路上的基因也被认为是孤独症的易感基因[3]。然而患者异质性过高是目前研究面临的主要问题之一，可导致研究结果难以重复。根据患者临床特征进一步进行临床亚组划分，是降低异质性的常用策略。
语言发育障碍是孤独症患者常见的症状，一方面患者语言发育进程较正常儿童及其他语言发育障碍的儿童延迟，另一方面患者间语言发育的进程差异较大；同时有动物研究[4-5]发现：RELN基因及信号通路上下游基因与语言发育可能存在一定关联。因此我们提出假设――RELN信号通路上的基因与具有特定类型的语言发育的孤独症患者相关，可能是该类患者的易感基因，在研究该信号通路时可以通过患者语言发育情况进行亚组划分以降低异质性。
本研究尝试使用孤独症患者部分有代表性的语言发育里程碑(development milestones)指标作为参数，应用聚类分析的方法对孤独症患者进行类别划分并根据聚类结果建立判别方程，利用方程对验证样本进行亚组划分，分析RELN通路相关基因单核苷酸多态性与各亚组之间的关系。
1. 对象与方法
1.1. 对象
本研究病例组共纳入两部分样本，第1部分为2006年10月至2011年5月在青岛以琳自闭症培训学校、青岛市儿童医院、郑州市康达能力训练中心、长沙市启航培智教育中心、中南大学湘雅二医院儿童精神卫生专科门诊招募的孤独症患儿共386例，其中男337人，女49人，入组年龄(57.51±16.78)个月；第2部分为2011年7月至2012年5月来自青岛以琳自闭症培训学校和在中南大学湘雅二医院儿童精神卫生专科门诊就诊的孤独症患儿319例，其中男269例，女50例，入组年龄(61.76±19.34)个月，与第1部分患者均无血缘关系，该部分患儿血样均在中南大学医学遗传学研究中心使用DNA芯片技术完成全基因组扫描。
所有病例均符合美国《精神障碍诊断与统计手册》第4版修订版(DSM-IV-TR)孤独症诊断标准，并排除有神经系统器质性疾病、单纯精神发育迟滞、单纯语言发育障碍、儿童精神分裂症等精神疾病患者和21-三体综合征、脆性X综合征等染色体疾病的患者。所有患儿均由其监护人签署知情同意书，本研究获得中南大学湘雅二医院医学伦理委员会批准[审批号：(2011)伦审第(科165)号]。
对照组来自中南大学医学遗传学研究中心遗传资源数据库，共纳入1 074例正常对照，所有对照均无精神疾病、神经系统疾病史及精神疾病家族史。
1.2. 方法
1.2.1. 临床资料采集
在监护人签署知情同意后，由两名精神科专科医师依照纳入及排除标准分别对患儿独立进行诊断，并由患儿的父母或直接照料者填写课题组自制的《儿童孤独症临床资料调查表》。
1.2.2. 基因型检测
本研究基因分型数据来自中南大学医学遗传学研究中心前期使用HumanHap CNV370K芯片完成并已发表的全基因组关联分析研究[6]，从中挑选出芯片覆盖到的RELN信号通路上6个相关基因(RELN、VLDLR、LRP8、DAB1、CDK5、FYN)及其上下游 50 kb区域内共393个单核苷酸多态化(single nucleotide polymorphism，SNP)位点的分型数据。
1.3. 统计学处理
1.3.1. 聚类分析
对病例组临床资料进行整理，剔除存在缺失值或右截尾数值的个案21例(第1部分12例，第2部分9例)；选择语言发育进程指标中“能够说第1个字的年龄”(onset age of first word，X 1)以及“从能够说第1个字到第1个词组之间的时间”(interval from the first word to the first phrase，X 2)2个指标作为参数，使用SPSS 17.0统计软件对病例组第1部分样本数据进行两步聚类分析；采用χ2检验、单因素方差分析比较各类别间一般资料及相关发育指标的差异。以P<0.05为差异有统计学意义。
1.3.2. 判别方程建立
以聚类分析中得到的分类作为依据，使用SPSS 17.0统计软件建立Bayes判别方程，通过交叉核实法(cross-validated，又称刀切法)评价判别效果，然后对病例组第2部分样本进行分类判别。
1.3.3. 病例-对照关联分析
使用Haploview 4.2 分析软件对纳入分析的SNP位点进行哈代-温伯格平衡(Hardy-Weinberg equilibrium，HWE)检验，并检视各位点基因分型成功率及最小等位基因频率。排除分型成功率<98%的位点，排除HWE及次要等位基因频率<5%的位点。对于符合条件的SNP位点再采用χ2检验比较等位基因频率在亚组划分前后各组与对照组之间的差异，检验水准α=0.05，P<0.05 为差异有统计学意义。为避免多重检验增大I型错误的概率，以Bonferroni法对检验水准进行校正，校正后的检验水准a=2.44×10-5。
2. 结 果
2.1. 聚类分析
第1部分符合要求的患儿374例，其X 1为6.0~48.0(17.34±9.95)个月，X 2为7.0~36.0(11.71±11.28)个月，所有个案中未见语言发育顺序异常的患者。依据贝叶斯信息准则(Bayesian Information Criterion，BIC)将该部分患者分为3组(分别命名为A1、B1、C1组，其中A1组103例，B1组163例，C1组105例，另有3例为离群值，未进入后续分析)。3组性别及入组年龄差异均无统计学意义(P>0.05)；而在X 1、X 2两项指标上，3组差异均有统计学意义(均P<0.001，表1)。
表1.
各组一般资料及语言发育指标的比较
Table 1 Comparison of demographic and selected language development indicators among the groups
| 组别 | n | 入组年龄/月 | 性别 | X 1(能够说第1个字的年龄)/月 | X 2(从能够说第1个字到第1个词组之间的时间)/月 | |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 男 | 女 | |||||
| A1组 | 103 | 56.49±14.49 | 95 | 8 | 11.83±4.37 | 24.55±8.67 |
| B1组 | 163 | 57.22±15.95 | 138 | 25 | 12.17±3.46 | 7.07±3.79 |
| C1组 | 105 | 58.43±19.59 | 94 | 11 | 30.94±7.60 | 4.73±4.80 |
| 统计量 | F=0.358 | χ2=3.729 | F=500.41 | F=379.10 | ||
| P | 0.699 | 0.155 | <0.001 | <0.001 | ||
进一步对两项指标的特征进行组间两两比较后发现：C1组患儿能说第1个字的年龄最晚，而A1、B1两组该指标差异均无统计学意义；3组患儿在语言发育时间上差异均有统计学意义，且A1>B1>C1。
3组患儿家长报告的首次发现患儿可能存在发育异常的年龄分别为(23.0±7.48)、(27.4±9.01)、(22.9±9.32)个月，单因素方差分析显示3组差异有统计学意义(F=20.34，P<0.001)。LSD法分析显示：B1组报告的首发年龄显著晚于A1组及C1组(P<0.001)，而A1组与C1组间差异无统计学意义(P=0.877)。
2.2. 判别方程建立及判别效果评价
根据聚类分析结果建立的Bayes判别方程为Y A= -14.442+0.525X 1+0.810X 2；Y B=-4.964+0.477X 1+0.264X 2；Y C=-19.843+1.175X 1+0.241X 2，使用交叉核实法评价方程判别效果，结果显示该方程误判概率为3.8%(表2)。
表2.
判别方程效果评价
Table 2 Evaluation of the effect of the established discriminant equation
| 训练样本聚类 | 预测分组/[例(%)] | 合计/[例(%)] | ||
|---|---|---|---|---|
| A1 | B1 | C1 | ||
| A1 | 96(93.2) | 7(6.8) | 0(0) | 103(100.0) |
| B1 | 0(0) | 163(100.0) | 0(0) | 163(100.0) |
| C1 | 0(0) | 7(6.7) | 98(93.3) | 105(100.0) |
对训练样本中96.2%的患者进行了正确分类。每个患者都是按照从该患者以外的所有其他患者派生的函数来分类的。
2.3. RELN通路基因关联分析
393个SNP位点以前述标准进行质量控制后，排除52个(13.2%)不符合纳入标准的SNP位点，纳入341个位点。通过Bayes判别方程对第2部分的310例患者进行分类，将其分为A2、B2、C2 3个亚组，A2组94例，B2组160例，C2组56例。使用Haploview软件进行单位点病例-对照关联分析，经Bonferroni法校正后的检验水准为双侧α=0.05/(341×6)=2.44×10-5。结果显示：在分组前，所有SNP位点均未通过检验(P>2.44×10-5)，而进行判别分组后，B2组患者LRP8基因rs1288502位点等位基因频率在病例组及对照组间差异有统计学意义(P=6.45×10-6)。各组关联分析结果中P值最小的3个位点详见表3。
表3.
各组患者RELN通路基因SNP的病例-对照关联分析
Table 3 Single marker case-control association analyses of selected SNPs in RELN signaling pathway related genes
| 组别 | 基因 | SNP* | 位置 | 关联等位基因 | HWE | 频率 | χ2 | P | |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 病例 | 对照 | ||||||||
| A2 | DAB1 | rs2764675 | 58295008 | A | 0.69 | 0.250 | 0.162 | 9.41 | 0.002 2 |
| DAB1 | rs264036 | 57444441 | A | 0.82 | 0.872 | 0.779 | 8.99 | 0.002 7 | |
| DAB1 | rs155295 | 57429987 | G | 0.60 | 0.872 | 0.789 | 7.40 | 0.006 5 | |
| B2 | LRP8 | rs1288502 | 53529742 | C | 1.0 | 0.222 | 0.128 | 20.35 | 6.5×10-6 |
| RELN | rs4483088 | 103394357 | G | 0.24 | 0.703 | 0.622 | 7.80 | 0.005 2 | |
| RELN | rs1404431 | 103223839 | A | 0.08 | 0.781 | 0.709 | 7.27 | 0.007 | |
| C2 | DAB1 | rs10889028 | 57398237 | A | 0.74 | 0.562 | 0.427 | 7.91 | 0.004 9 |
| DAB1 | rs1831870 | 57399791 | A | 0.87 | 0.562 | 0.429 | 7.74 | 0.005 4 | |
| DAB1 | rs155288 | 57405075 | G | 0.51 | 0.562 | 0.433 | 7.20 | 0.007 3 | |
*仅展示各组关联分析中P值最小的3个位点。SNP：单核苷酸多态性；HWE：哈代-温伯格平衡。
3. 讨 论
RELN基因的编码蛋白Reelin是Cajal-Retzius细胞分泌的一种细胞外基质糖蛋白，对胚胎期大脑神经元的迁移及定位具有重要的调节作用，还可以影响海马部位神经突触的发生和神经元可塑性[7-8]。Reelin经分泌后需与其在神经细胞膜上的主要受体VLDLR和LRP8结合才能进入神经细胞，而后在酪氨酸家族激酶(Src-family tyrosine kinase，SFK)中的FYN和周期素依赖性蛋白激酶5(cyclin-dependent kinase-5，CDK-5)协同作用下使细胞质内调节蛋白Dab1磷酸化。磷酸化的Dab1再激活下游如PI3K和 PKB/AKT1通路上的其他激酶，从而控制神经元的迁移，并影响皮层结构形成[8-9]。
RELN信号通路与孤独症的关系已经得到部分研究[3, 10]的支持。RELN通路基因编码的蛋白质在幼年期大脑皮质、小脑、纹状体等与语言发育密切相关的皮质下结构中均有表达[11-12]，而孤独症患者这些结构相关的蛋白质表达水平显著降低[2]。此外，RELN基因敲除小鼠(reeler纯合子及杂合子小鼠)出现超声波发声(ultrasonic vocalization，USV)峰值的时间落后于野生型小鼠，发出的波形模式的种类少于野生型小鼠[2]。2016年Fraley等[5]研究发现：除RELN基因外，该信号通路下游基因DAB1表达降低或缺乏的杂合子(Dab1+/lacZ)及纯合突变(Dab1lacZ/lacZ)小鼠与野生型(Dab1+/+)小鼠相比，USV发声情况的发展轨迹存在差异[13]。这些研究结果提示该信号通路可能与孤独症的语言发育相关。本研究发现LRP8基因与孤独症中特定语言发育特征有关，从而支持了这一观点。
对RELN通路相关基因常见变异与语言发育等孤独症特征关系的临床研究结果目前并不十分一致。2018年一项利用中国汉族孤独症人群样本对RELN基因上2个常被报道的孤独症相关的SNP(rs736707和rs2229864)与孤独症各维度症状的相关分析结果显示：2个SNP位点与孤独症语言发育异常之间并无明显关联[14]。这可能与样本异质性过高等原因有关。本研究选择在临床上2个语言发育里程碑指标建立了判别方程，该方程误判率较低，提示该方程较为稳定，对患者进行亚组划分相对可靠。在亚组划分前，所有SNP位点等位基因频率在病例组与对照组之间无明显差异；而应用该方程进行亚组划分后，其中一类语言发育延迟患者LRP8基因rs1288502位点与对照相比较存在显著差异，表明通过亚组划分降低了孤独症样本的异质性。在研究RELN通路与孤独症关系时，该判别方程作为划分亚组、降低异质性的工具可能有一定的应用价值。
本研究利用该判别模型划分出的3类不同的亚组，初步分析显示第2类患者的2个语言发育里程碑指标并不明显落后于正常发育儿童，这提示该分类下患者的主要异常并不是时间维度上的语言发育迟缓，而可能是他们对语言的理解、使用或其他非言语沟通方面存在更明显的障碍，或是该类患者可能有较高的概率存在“发育倒退”这一特殊的临床特征。此外，本研究发现各组间患者父母报告最早发现异常的时间存在差异，其中以B1组最晚，这与父母对子女语言发育的情况相对社交或行为表现更为关注和敏感有关；同时也表明特定的孤独症语言发育特征可能会造成患者就诊及诊断相对延迟的情况。
本研究的不足之处在于：1)第2部分样本量相对较少，特别是在划分亚组后各位点的统计效能下降，尚不能确定RELN通路基因与另2个亚组是否相关；2)对照组样本缺少相应的临床数据，本研究目前的结果难以说明LRP8基因与正常儿童语言发育之间的关系，仅能提示该基因影响了孤独症患者的语言发育进程。在未来的研究中，一方面需要在纵向队列中对本研究提出的孤独症语言发育进程亚组的实际临床意义进行验证；另一方面还需在扩大样本量的基础上进一步探索RELN通路基因的基因型或单倍型与有明确临床意义的孤独症亚组或临床特征之间的关系。
综上，本研究通过孤独症患者语言发育情况建立了判别方程，有助于在分析RELN信号通路与孤独症关系时降低异质性。本研究还发现RELN信号通路相关基因中LRP8基因与孤独症患者特定类型的语言发育相关。
| 英文缩写 | 中文名称 | 英文缩写 | 中文名称 | 英文缩写 | 中文名称 |
|---|---|---|---|---|---|
| 5-FU | 5-氟尿嘧啶 | FDA | 美国食品药品管理局 | PaCO2 | 动脉血二氧化碳分压 |
| 5-HT | 5-羟色胺 | GFP | 绿色荧光蛋白 | PaO2 | 动脉血氧分压 |
| ABC法 | 抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶复合物法 | GSH | 谷胱甘肽 | PBS | 磷酸盐缓冲液 |
| ACh | 乙酰胆碱 | HAV | 甲型肝炎病毒 | PCR | 聚合酶链反应 |
| AIDS | 获得性免疫缺陷综合征 | Hb | 血红蛋白 | PET/CT | 正电子发射计算机体层显像仪 |
| ALT | 谷丙转氨酶 | HBV | 乙型肝炎病毒 | PI | 碘化丙啶 |
| AngII | 血管紧张素II | HCG | 人绒毛膜促性腺激素 | PI3K | 磷脂酰肌醇3激酶 |
| Annexin V-FITC | 膜联蛋V标记的异硫氰酸荧光素 | HDL-C | 高密度脂蛋白胆固醇 | PLT | 血小板 |
| APTT | 活化部分凝血活酶时间 | HE | 苏木精-伊红染色 | PT | 凝血酶原时间 |
| AST | 谷草转氨酶 | HGF | 肝细胞生长因子 | PVDF | 聚偏氟乙烯 |
| ATP | 三磷酸腺苷 | HIV | 人类免疫缺陷病毒 | RBC | 红细胞 |
| BCA | 二辛可宁酸 | HPF | 高倍视野 | real-time PCR | 实时聚合酶链反应 |
| BMI | 体重指数 | HR | 心率 | real-time RT-PCR | 实时反转录聚合酶链反应 |
| BP | 血压 | HRP | 辣根过氧化物酶 | RIPA | 放射免疫沉淀法 |
| BSA | 牛血清白蛋白 | HSP | 热激蛋白 | RNA | 核糖核酸 |
| BUN | 尿素氮 | IC50 | 半数抑制浓度 | ROS | 活性氧 |
| CCK-8 | 细胞计数试剂盒-8 | ICU | 重症监护病房 | RT-PCR | 反转录聚合酶链反应 |
| COX-2 | 环氧合酶-2 | IFN | 干扰素 | SABC | 链霉抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶复合物法 |
| Cr | 肌酐 | IL | 白细胞介素 | SCr | 血肌酐 |
| CRP | C反应蛋白 | iNOS | 诱导型一氧化氮合酶 | SDS-PAGE | SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 |
| CT | 计算机体层摄影 | IPG | 固相pH梯度 | SO2 | 血氧饱和度 |
| CV | 变异系数 | JNK | 氨基末端激酶 | SOD | 超氧化物歧化酶 |
| DAB | 二氨基联苯胺 | LDL-C | 低密度脂蛋白胆固醇 | SPF | 无特定病原体 |
| ddH2O | 双蒸水 | LPS | 内毒素/脂多糖 | SP法 | 链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶法 |
| DMEM | 杜尔贝科改良伊格尔培养基 | MAP | 平均动脉压 | STAT | 信号转导及转录激活因子 |
| DMSO | 二甲基亚砜 | MAPK | 丝裂原激活的蛋白激酶 | TBIL | 总胆红素 |
| DNA | 脱氧核糖核酸 | MDA | 丙二醛 | TBST | Tris-盐酸洗膜缓冲液 |
| ECG | 心电图 | miRNA | 微RNA | TC | 总胆固醇 |
| ECL | 增强化学发光法 | MMP | 基质金属蛋白酶 | TG | 三酰甘油 |
| ECM | 细胞外基质 | MRI | 磁共振成像 | TGF | 转化生长因子 |
| EDTA | 乙二胺四乙酸 | mTOR | 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 | Th | 辅助性T细胞 |
| EEG | 脑电图 | MTT | 四甲基偶氮唑盐微量酶反应 | TLR | Toll样受体 |
| EGF | 表皮生长因子 | NADPH | 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸 | TNF | 肿瘤坏死因子 |
| ELISA | 酶联免疫吸附测定 | NF-κB | 核因子-κB | TUNEL | 原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法 |
| eNOS | 内皮型一氧化氮合酶 | NK细胞 | 自然杀伤细胞 | VEGF | 血管内皮生长因子 |
| ERK | 细胞外调节蛋白激酶 | NO | 一氧化氮 | VLDL-C | 极低密度脂蛋白胆固醇 |
| ESR | 红细胞沉降率 | NOS | 一氧化氮合酶 | WBC | 白细胞 |
| FBS | 胎牛血清 | NS | 生理氯化钠溶液 | WHO | 世界卫生组织 |
本刊对部分常用词汇允许直接使用缩写，即首次出现时可不标注中文。
基金资助
国家重点基础研究发展计划(2012CB517901)；湖南省自然科学基金(2020JJ5830)。
This work was supported by the National Basic Research Program (2012CB517901) and the Natural Science Foundation of Hunan Province (2020JJ5830), China.
利益冲突声明
作者声称无任何利益冲突。
作者贡献
沈屹东 样本采集，数据分析及文章撰写；董慧茜 数据分析及文章撰写；赵靖平、夏昆 课题设计、研究统筹；欧建君 样本采集，课题设计及文章修改。所有作者阅读并同意最终的文本。
原文网址
http://xbyxb.csu.edu.cn/xbwk/fileup/PDF/202207858.pdf
参考文献
- 1. Developmental Disabilities Monitoring Network Surveillance Year 2010. Principal Investigators, Centers for Disease Control and Prevention (CDC). Prevalence of autism spectrum disorder among children aged 8 years-autism and developmental disabilities monitoring network, 11 sites, United States, 2010[J]. MMWR Surveill Summ, 2014, 63(2): 1-21. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24670961/ [PubMed] [Google Scholar]
- 2. Fatemi SH, Snow AV, Stary JM, et al. Reelin signaling is impaired in autism[J]. Biol Psychiatry, 2005, 57(7): 777-787. 10.1016/j.biopsych.2004.12.018. [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
- 3. Li J, Liu J, Zhao LN, et al. Association study between genes in Reelin signaling pathway and autism identifies DAB1 as a susceptibility gene in a Chinese Han population[J]. Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry, 2013, 44: 226-232. 10.1016/j.pnpbp.2013.01.004. [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
- 4. Romano E, Michetti C, Caruso A, et al. Characterization of neonatal vocal and motor repertoire of reelin mutant mice[J]. PLoS One, 2013, 8(5): e64407[2019-05-23]. 10.1371/journal.pone.0064407. [DOI] [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]
- 5. Fraley ER, Burkett ZD, Day NF, et al. Mice with Dab1 or Vldlr insufficiency exhibit abnormal neonatal vocalization patterns[J]. Sci Rep, 2016, 6: 25807. 10.1038/srep25807. [DOI] [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]
- 6. Xia K, Guo H, Hu Z, et al. Common genetic variants on 1p13.2 associate with risk of autism[J]. Mol Psychiatry, 2014, 19(11): 1212-1219. 10.1038/mp.2013.146. [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
- 7. Folsom TD, Fatemi SH. The involvement of Reelin in neurodevelopmental disorders[J]. Neuropharmacology, 2013, 68: 122-135. 10.1016/j.neuropharm.2012.08.015. [DOI] [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]
- 8. Lakatosova S, Ostatnikova D. Reelin and its complex involvement in brain development and function[J]. Int J Biochem Cell Biol, 2012, 44(9): 1501-1504. 10.1016/j.biocel.2012.06.002. [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
- 9. Rice DS, Sheldon M, D’Arcangelo G, et al. Disabled-1 acts downstream of Reelin in a signaling pathway that controls laminar organization in the mammalian brain[J]. Development, 1998, 125(18): 3719-3729. 10.1242/dev.125.18.3719. [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
- 10. Fatemi SH, Stary JM, Egan EA. Reduced blood levels of reelin as a vulnerability factor in pathophysiology of autistic disorder[J]. Cell Mol Neurobiol, 2002, 22(2): 139-152. 10.1023/a:1019857620251. [DOI] [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]
- 11. Sharaf A, Rahhal B, Spittau B, et al. Localization of reelin signaling pathway components in murine midbrain and striatum[J]. Cell Tissue Res, 2015, 359(2): 393-407. 10.1007/s00441-014-2022-6. [DOI] [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]
- 12. Perez-Garcia CG, Tissir F, Goffinet AM, et al. Reelin receptors in developing laminated brain structures of mouse and human[J]. Eur J Neurosci, 2004, 20(10): 2827-2832. 10.1111/j.1460-9568.2004.03733.x. [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
- 13. Laviola G, Adriani W, Gaudino C, et al. Paradoxical effects of prenatal acetylcholinesterase blockade on neuro-behavioral development and drug-induced stereotypies in reeler mutant mice[J]. Psychopharmacology, 2006, 187(3): 331-344. 10.1007/s00213-006-0426-z. [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
- 14. Wang GF, Ye S, Gao L, et al. Two single-nucleotide polymorphisms of the RELN gene and symptom-based and developmental deficits among children and adolescents with autistic spectrum disorders in the Tianjin, China[J]. Behav Brain Res, 2018, 350: 1-5. 10.1016/j.bbr.2018.04.048. [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
Associated Data
This section collects any data citations, data availability statements, or supplementary materials included in this article.
Supplementary Materials
| 英文缩写 | 中文名称 | 英文缩写 | 中文名称 | 英文缩写 | 中文名称 |
|---|---|---|---|---|---|
| 5-FU | 5-氟尿嘧啶 | FDA | 美国食品药品管理局 | PaCO2 | 动脉血二氧化碳分压 |
| 5-HT | 5-羟色胺 | GFP | 绿色荧光蛋白 | PaO2 | 动脉血氧分压 |
| ABC法 | 抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶复合物法 | GSH | 谷胱甘肽 | PBS | 磷酸盐缓冲液 |
| ACh | 乙酰胆碱 | HAV | 甲型肝炎病毒 | PCR | 聚合酶链反应 |
| AIDS | 获得性免疫缺陷综合征 | Hb | 血红蛋白 | PET/CT | 正电子发射计算机体层显像仪 |
| ALT | 谷丙转氨酶 | HBV | 乙型肝炎病毒 | PI | 碘化丙啶 |
| AngII | 血管紧张素II | HCG | 人绒毛膜促性腺激素 | PI3K | 磷脂酰肌醇3激酶 |
| Annexin V-FITC | 膜联蛋V标记的异硫氰酸荧光素 | HDL-C | 高密度脂蛋白胆固醇 | PLT | 血小板 |
| APTT | 活化部分凝血活酶时间 | HE | 苏木精-伊红染色 | PT | 凝血酶原时间 |
| AST | 谷草转氨酶 | HGF | 肝细胞生长因子 | PVDF | 聚偏氟乙烯 |
| ATP | 三磷酸腺苷 | HIV | 人类免疫缺陷病毒 | RBC | 红细胞 |
| BCA | 二辛可宁酸 | HPF | 高倍视野 | real-time PCR | 实时聚合酶链反应 |
| BMI | 体重指数 | HR | 心率 | real-time RT-PCR | 实时反转录聚合酶链反应 |
| BP | 血压 | HRP | 辣根过氧化物酶 | RIPA | 放射免疫沉淀法 |
| BSA | 牛血清白蛋白 | HSP | 热激蛋白 | RNA | 核糖核酸 |
| BUN | 尿素氮 | IC50 | 半数抑制浓度 | ROS | 活性氧 |
| CCK-8 | 细胞计数试剂盒-8 | ICU | 重症监护病房 | RT-PCR | 反转录聚合酶链反应 |
| COX-2 | 环氧合酶-2 | IFN | 干扰素 | SABC | 链霉抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶复合物法 |
| Cr | 肌酐 | IL | 白细胞介素 | SCr | 血肌酐 |
| CRP | C反应蛋白 | iNOS | 诱导型一氧化氮合酶 | SDS-PAGE | SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 |
| CT | 计算机体层摄影 | IPG | 固相pH梯度 | SO2 | 血氧饱和度 |
| CV | 变异系数 | JNK | 氨基末端激酶 | SOD | 超氧化物歧化酶 |
| DAB | 二氨基联苯胺 | LDL-C | 低密度脂蛋白胆固醇 | SPF | 无特定病原体 |
| ddH2O | 双蒸水 | LPS | 内毒素/脂多糖 | SP法 | 链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶法 |
| DMEM | 杜尔贝科改良伊格尔培养基 | MAP | 平均动脉压 | STAT | 信号转导及转录激活因子 |
| DMSO | 二甲基亚砜 | MAPK | 丝裂原激活的蛋白激酶 | TBIL | 总胆红素 |
| DNA | 脱氧核糖核酸 | MDA | 丙二醛 | TBST | Tris-盐酸洗膜缓冲液 |
| ECG | 心电图 | miRNA | 微RNA | TC | 总胆固醇 |
| ECL | 增强化学发光法 | MMP | 基质金属蛋白酶 | TG | 三酰甘油 |
| ECM | 细胞外基质 | MRI | 磁共振成像 | TGF | 转化生长因子 |
| EDTA | 乙二胺四乙酸 | mTOR | 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 | Th | 辅助性T细胞 |
| EEG | 脑电图 | MTT | 四甲基偶氮唑盐微量酶反应 | TLR | Toll样受体 |
| EGF | 表皮生长因子 | NADPH | 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸 | TNF | 肿瘤坏死因子 |
| ELISA | 酶联免疫吸附测定 | NF-κB | 核因子-κB | TUNEL | 原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法 |
| eNOS | 内皮型一氧化氮合酶 | NK细胞 | 自然杀伤细胞 | VEGF | 血管内皮生长因子 |
| ERK | 细胞外调节蛋白激酶 | NO | 一氧化氮 | VLDL-C | 极低密度脂蛋白胆固醇 |
| ESR | 红细胞沉降率 | NOS | 一氧化氮合酶 | WBC | 白细胞 |
| FBS | 胎牛血清 | NS | 生理氯化钠溶液 | WHO | 世界卫生组织 |
本刊对部分常用词汇允许直接使用缩写，即首次出现时可不标注中文。