Abstract
目的
高原环境具有低氧分压的特点，氧分压降低导致肺泡携氧量降低，组织可利用氧气减少，从而引发机体组织损伤。西洛他唑是一种磷酸二酯酶III抑制剂，能够增加血红蛋白(hemoglobin，Hb)在组织中的释氧量。本研究旨在探讨西洛他唑的抗缺氧活性及在急进高原缺氧模型中的抗缺氧作用。
方法
将40只雄性BALB/C小鼠随机分为西洛他唑低(6.5 mg/kg)、中(13 mg/kg)、高剂量(26 mg/kg)组和对照组，采用常压密闭缺氧实验，考察西洛他唑的抗缺氧活性，筛选最佳给药剂量。将24只雄性Wistar大鼠随机分为常氧对照组、缺氧模型组、乙酰唑胺(22.33 mg/kg)组和西洛他唑(9 mg/kg)组，急进4 010 m高原缺氧3 d后，采集腹主动脉血测定血气指标，用酶联免疫吸附法测定血浆中白细胞介素6(interleukin-6，IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)的水平，测定主要组织的丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活力、谷胱甘肽(glutataione，GSH)含量，HE染色观察大鼠组织病理损伤程度。
结果
与对照组相比，西洛他唑低、中、高剂量组小鼠存活时间均显著延长，其中中剂量组存活时间最长，延长率最高(29.34%)，中剂量为最佳给药剂量。与缺氧模型组相比，西洛他唑组大鼠Hb氧饱和度为50%时的氧分压(P50)升高1.03%，Hb含量、红细胞比容分别降低8.46%、8.43%；血浆中IL-6、TNF-α水平分别降低50.65%、30.77%；心肌、脑、肺、肝、肾组织中MDA含量分别降低37.12%、29.55%、25.00%、39.34%、21.47%，SOD活力分别升高94.93%、9.14%、9.42%、13.29%、20.80%，GSH含量分别升高95.24%、28.62%、28.57%、20.80%、44.00%。HE染色结果提示西洛他唑组大鼠缺氧后心肌、肺、肾组织损伤较缺氧模型组明显改善。
结论
西洛他唑对急进高原缺氧所致的氧化应激和炎症反应有明显的改善作用，对缺氧所致的组织损伤有明显的保护作用，提示其具有明显的抗缺氧活性。
Keywords: 西洛他唑, 急进高原, 组织损伤, 抗缺氧
Abstract
Objective
The plateau environment is characterized by low oxygen partial pressure, leading to the reduction of oxygen carrying capacity in alveoli and the reduction of available oxygen in tissues, and thus causing tissue damage. Cilostazol is a phosphodiesterase III inhibitor that has been reported to increase the oxygen release of hemoglobin (Hb) in tissues. This study aims to explore the anti-hypoxic activity of cilostazol and its anti-hypoxic effect.
Methods
A total of 40 male BALB/C mice were randomly divided into a low-dose cilostazol (6.5 mg/kg) group, a medium-dose (13 mg/kg) group, a high-dose (26 mg/kg) group, and a control group. The atmospheric airtight hypoxia experiment was used to investigate the anti-hypoxic activity of cilostazol and to screen the optimal dosage. Twenty-four male Wistar rats were randomly divided into a normoxia control group, a hypoxia model group, an acetazolamide (22.33 mg/kg) group, and a cilostazol (9 mg/kg) group. After 3 days of hypoxia in the 4 010 m high altitude, blood from the abdominal aorta was collected to determine blood gas indicators, the levels of IL-6 and TNF-α in plasma were determined by enzyme-linked immunosorbent assay, and the levels of malondialdehyde (MDA), superoxide dismutase (SOD), and glutataione (GSH) were measured. The degree of pathological damage for rat tissues was observed with HE staining.
Results
Compared with the control group, the survival time of mice in the low, medium, and high dose group of cilostazol was significantly prolonged, and the survival time of mice in the medium dose group was the longest, with an extension rate at 29.34%, so the medium dose was the best dose. Compared with the hypoxia model group, the P50 (oxygen partial pressure at Hb oxygen saturation of 50%) value of rats in the cilostazol group was significantly increased by 1.03%; Hb and Hct were significantly reduced by 8.46% and 8.43%, and the levels of IL-6 and TNF-α in plasma were reduced by 50.65% and 30.77%. The MDA contents in heart, brain, lung, liver, and kidney tissues were reduced by 37.12%, 29.55%, 25.00%, 39.34%, and 21.47%, respectively. The SOD activities were increased by 94.93%, 9.14%, 9.42%, 13.29%, and 20.80%, respectively. The GSH contents were increased by 95.24%, 28.62%, 28.57%, 20.80%, and 44.00%, respectively. The results of HE staining showed that compared with the hypoxia model group, cilostazol significantly improved the damage of heart, lung, and kidney tissues in rats after hypoxia.
Conclusion
Cilostazol can significantly improve the oxidative stress and inflammatory reaction caused by rapid altitude hypoxia, and it has a significant protective effect on tissue damage caused by hypoxia, suggesting that it has obvious anti-hypoxic activity.
Keywords: cilostazol, rapid to high altitude, tissue damage, anti-hypoxia
人体在急进高原2 500 m以上时易发生急性高原病，表现为头痛、失眠、腹泻、呼吸困难等，严重者可发生高原肺水肿、高原脑水肿[1]。低氧分压是急性高原病产生的主要原因，而血红蛋白(hemoglobin，Hb)是机体中负责结合、利用、运输、释放氧气的重要物质，寻找内源性物质或外源性药物提高Hb在肺泡中的摄氧量或组织中的供氧量将可能从氧气供应的根源上缓解高原缺氧[2]。目前临床上暂无相关调节Hb氧气结合或释放的药物来预防或治疗急性高原病。西洛他唑是一种磷酸二酯酶III抑制剂，具有可逆性抑制血小板聚集和血管扩张的作用，可增加单位时间内肢体的血流量[3]。研究表明：西洛他唑对慢性局灶性脑缺血具有改善作用[4-5]，能够使Hb在组织中的释氧量增加[6]。为了验证西洛他唑在急性缺氧条件下的抗高原缺氧作用，本实验通过小鼠常压密闭缺氧实验及大鼠急进高原实地缺氧实验对西洛他唑的抗缺氧能力进行初步研究。
1. 材料与方法
1.1. 动物与分组
40只SPF级健康雄性BALB/C小鼠[许可证号：SYXK(军) 2020-0032]购自联勤保障部队第九四〇医院动物实验科，体重(20±2) g，随机分为4组(n=10)：西洛他唑高、中、低剂量组和对照组。24只SPF级健康成年雄性Wistar大鼠[许可证号：SCXK(辽)2020-0001]购自辽宁长生生物技术股份有限公司，体重(200±20) g，随机分为4组(n=6)：常氧对照组、缺氧模型组、乙酰唑胺组、西洛他唑组。
1.2. 药物和试剂
西洛他唑胶囊(规格：50 mg×12粒)为江苏万邦生化医药集团有限责任公司产品，乙酰唑胺(纯度>98.0%，CAS号：59-66-5)为上海源叶生物科技有限公司产品，0.9%氯化钠注射液(500 mL，批号：2007122002)为石家庄四药有限公司产品，4%多聚甲醛固定液(500 mL)为武汉赛维尔生物科技有限公司产品，大鼠TNF-α试剂盒和大鼠IL-6试剂盒为上海泛科实业有限公司产品，MDA试剂盒、SOD试剂盒、GSH试剂盒为南京建成生物工程研究所产品。
1.3. 仪器
分析天平为上海梅特勒-托利多有限公司产品，PHOX血气分析仪为美国Nova生物医学公司产品，CKX53奥林巴斯倒置显微镜为甘肃嘉瑞贸易有限责任公司产品，SpectraMax@ i3全自动荧光酶标仪为美谷分子仪器(上海)有限公司产品，全自动样品快速研磨仪为上海净信实业发展有限公司产品，Microfuge22R台式冷冻离心机为美国BECKMAN公司产品，离心机为德国Sigma公司产品。
1.4. 方法
1.4.1. 常压密闭缺氧实验
将雄性BALB/C小鼠饲养于SPF级环境(温度25 ℃±1 ℃，湿度50%~70%)，自由摄食和饮水。适应饲养3 d后开始实验。西洛他唑人体临床剂量为100 mg/次，2次/d，按照体表面积折算法[大鼠的折算系数=(体型系数大鼠× )/(体型系数人× )]换算，小鼠给药剂量为13 mg/kg。实验时以等效剂量的0.5、1、2倍对应西洛他唑低(6.5 mg/kg)、中(13 mg/kg)、高剂量(26 mg/kg)组，均去除西洛他唑胶囊外壳，称取其中的药粉溶于生理盐水，对照组给予等体积生理盐水，灌胃给药，第4天上午8点给药1 h后，将小鼠放入250 mL广口瓶中(瓶中事先放入5 g钠石灰，用于吸收CO2与水，并在瓶底放入滤纸用于吸取尿液与粪便)，在广口瓶瓶口涂抹凡士林用于密闭，旋紧瓶塞后开始计时，当小鼠呼吸停止时结束计时，记录小鼠在广口瓶中的存活时间[7]。
1.4.2. 高原实地缺氧实验
将健康成年雄性Wistar大鼠饲养于兰州SPF级动物房(36.03°N，103.40°E，海拔1 500 m，温度25 ℃±1 ℃，湿度50%~70%)中，期间自由饮水、饮食。第4天上午8点后开始实验。西洛他唑组灌胃给药剂量为9 mg/kg，乙酰唑胺组给药剂量为22.33 mg/kg[8]，溶于含2%吐温的生理盐水中，常氧对照组和缺氧模型组给予等体积生理盐水，每日2次，连续给药4 d，第5天上午8点给药后，缺氧模型组、乙酰唑胺组、西洛他唑组大鼠从兰州由保温箱式货车急进至西宁机场后，再航空急进至青海省玉树藏族自治州高原实地SPF级动物房(33.1°N，96.7°E，海拔4 010 m，温度25 ℃±1 ℃，湿度50%~70%)，在运输过程中以果冻自由补水，于SPF级动物房灌胃给药3 d，第4天上午8点给药1 h后分别于眼眶静脉丛和腹主动脉采血、摘取心、肝、脑、肺、肾用于后续指标测定。
1.5. 观察指标
1.5.1. 血气指标
大鼠麻醉后，使用经肝素预先润洗过的1 mL注射器采集腹主动脉血0.5 mL，并立即用血气分析仪进行分析。
1.5.2. 炎症因子指标
于大鼠眼眶静脉丛采血1 mL，以3 500 r/min在室温下离心10 min后取其上清液，置于液氮罐中保存运输，运抵兰州后转移至-80 ℃冰箱保存。采用酶联免疫吸附法测定血浆中白细胞介素6(interleukin-6，IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)水平，严格按照试剂盒说明书进行操作。
1.5.3. 氧化应激指标
大鼠麻醉后完整摘取其心、肝、脑、肺、肾，于预冷的生理盐水中洗去血渍并用滤纸吸干水分，置于液氮罐中保存运输，运抵兰州后转移至-80 ℃冰箱保存。测定时，称取一定量的组织并剪碎，按照1꞉9(m꞉v)的比例加入预冷的生理盐水，于快速研磨仪中上下研磨，以4 000 r/min于4 ℃离心10 min后，取上清液制备10%的组织匀浆。严格按照试剂盒说明书检测丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量、总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活力、谷胱甘肽(glutataione，GSH)含量。
1.5.4. HE染色
将上述完整摘取的大鼠心、肝、脑、肺、肾于预冷的生理盐水中洗去血渍并用滤纸吸干水分，置于4%多聚甲醛固定液中固定，待充分固定后用石蜡包埋组织切片，经HE染色后观察其病理变化。
1.6. 统计学处理
采用SPSS 21.0统计软件进行数据处理，计量资料以均数±标准差( ±s)表示，多组比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t法，P<0.05为差异有统计学意义。
2. 结 果
2.1. 西洛他唑对常压密闭缺氧小鼠存活的影响
与对照组比较，西洛他唑低、中、高剂量组的存活时间均明显延长，其中西洛他唑中剂量组的延长率最高，为29.34%(表1)。
表1.
不同剂量西洛他唑对常压密闭缺氧小鼠存活时间的 影响(n=10， ±s)
Table 1 Effects of different doses of cilostazol on the survival time of mice under condition of atmospheric airtight with the lack of oxygen (n=10, ±s)
| 组别 | 体重/g | 存活时间/min | 延长率/% |
|---|---|---|---|
| 对照组 | 20.9±0.738 | 29.07±2.02 | |
| 低剂量组 | 21.1±1.197 | 33.14±3.70* | 14.00 |
| 中剂量组 | 20.8±1.398 | 37.60±4.33** | 29.34 |
| 高剂量组 | 20.5±0.972 | 30.78±0.56* | 5.88 |
与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。
2.2. 西洛他唑对高原实地缺氧大鼠的保护作用
2.2.1. 各组血气指标的比较
与缺氧模型组比较，乙酰唑胺组和西洛他唑组的Hb含量分别降低10.52%和8.46%(均P<0.01)，HCT含量分别降低12.05%和8.43%(均P<0.01)，Hb氧饱和度为50%时的氧分压(P50)分别升高1.45%和1.03%(均P<0.01，表2)。
表2.
各组血气指标的比较(n=6， ±s)
Table 2 Comparison of blood gas indexes in each group (n=6, ±s)
| 组别 | SatO2/% | Hb/(g·L-1) | Hct/% | P50/mmHg |
|---|---|---|---|---|
| 常氧对照组 | 96.70±0.58 | 118.50±2.74 | 35.17±1.33 | 26.62±0.21 |
| 缺氧模型组 | 91.08±0.46** | 137.83±2.14** | 41.50±0.55** | 26.25±0.05** |
| 乙酰唑胺组 | 91.47±1.00 | 123.33±2.50†† | 36.50±0.84†† | 26.63±0.05†† |
| 西洛他唑组 | 91.32±1.18 | 126.17±0.98†† | 38.00±0.00†† | 26.52±0.04†† |
SatO2：动脉血氧饱和度；Hb：血红蛋白；Hct：红细胞比容；P50：Hb氧饱和度为50%时的氧分压。与常氧对照组比较，**P<0.01；与缺氧模型组比较，††P<0.01。
2.2.2. 各组炎症因子的比较
乙酰唑胺组和西洛他唑组的IL-6水平较缺氧模型组分别降低45.50%和50.65%(均P<0.01)，TNF-α水平较缺氧模型组分别降低23.20%、30.77%(均P<0.01，表3)。
表3.
各组炎症因子的比较(n=6， ±s)
Table 3 Comparison of inflammatory factors in each group (n=6, ±s)
| 组别 | IL-6/(pg·mL-1) | TNF-α/(ng·L-1) |
|---|---|---|
| 常氧对照组 | 61.25±8.29 | 185.17±12.16 |
| 缺氧模型组 | 101.54±10.63** | 233.30±6.67** |
| 乙酰唑胺组 | 55.34±2.90†† | 179.18±15.40†† |
| 西洛他唑组 | 50.11±4.37†† | 161.52±7.85†† |
与常氧对照组比较，**P<0.01；与缺氧模型组比较，††P<0.01。
2.2.3. 各组氧化应激指标的比较
心肌组织中乙酰唑胺组和西洛他唑组MDA含量较缺氧模型组分别降低32.13%和37.12%(均P<0.01)，SOD活力分别升高91.18%和94.93%(均P<0.01)，GSH含量分别升高82.54%和95.24%(均P<0.01)。脑组织中乙酰唑胺组和西洛他唑组MDA含量较缺氧模型组分别降低43.94%和29.55%(均P<0.01)，西洛他唑组SOD活力升高9.14%(P<0.05)，GSH含量升高28.62%(P<0.05)。肺组织中乙酰唑胺组和西洛他唑组MDA含量较缺氧模型组分别降低30.56%和25.00%(均P<0.01)，SOD活力分别升高14.16%和9.42%(均 P<0.05)、GSH含量分别升高31.43%和28.57%(均P<0.05)。肝组织中西洛他唑组MDA含量较缺氧模型组降低39.34%(P<0.01)，GSH含量升高20.80%(P<0.05)，乙酰唑胺组和西洛他唑组SOD活力分别升高16.30%和13.29%(均P<0.01)。肾组织中乙酰唑胺组和西洛他唑组MDA含量较缺氧模型组分别降低19.02%和21.47%(均P<0.05)，GSH含量分别升高29.60%和44.00%(分别P<0.05，P<0.01)，西洛他唑组SOD活力升高20.80%(P<0.01，表4)。
表4.
各组大鼠心肌、脑、肺、肝、肾组织中MDA、SOD、GSH含量的比较(n=6， ±s)
Table 4 Comparison of MDA, SOD, and GSH contents in heart, brain, lung, liver, and kidney tissues of rats in each group
| 组别 | 心肌 | 脑 | ||||
|---|---|---|---|---|---|---|
|
MDA/ (nmol·mg Prot-1) |
SOD/ (U·mg Prot-1) |
GSH/ (mg·g Prot-1) |
MDA/ (nmol·mg Prot-1) |
SOD/ (U·mg Prot-1) |
GSH/ (mg·g Prot-1) |
|
| 常氧对照组 | 1.69±0.38 | 787.09±229.30 | 0.98±0.17 | 0.96±0.13 | 448.04±11.80 | 7.51±0.85 |
| 缺氧模型组 | 3.61±0.57** | 456.25±151.64* | 0.63±0.14 | 1.32±0.27** | 437.96±29.84 | 5.52±0.98* |
| 乙酰唑胺组 | 2.45±0.95†† | 872.28±194.01†† | 1.15±0.25†† | 0.74±0.14†† | 461.04±40.56 | 6.54±0.93 |
| 西洛他唑组 | 2.27±0.69†† | 889.37±142.74†† | 1.23±0.30†† | 0.93±0.09†† | 477.97±29.74† | 7.10±1.01† |
| 组别 | 肺 | 肝 | ||||
|---|---|---|---|---|---|---|
|
MDA/ (nmol·mg Prot-1) |
SOD/ (U·mg Prot-1) |
GSH/ (mg·g Prot-1) |
MDA/ (nmol·mg Prot-1) |
SOD/ (U·mg Prot-1) |
GSH/ (mg·g Prot-1) |
|
| 常氧对照组 | 0.28±0.02 | 134.21±3.97 | 0.49±0.09 | 0.52±0.02 | 1 105.92±88.87 | 10.53±0.92 |
| 缺氧模型组 | 0.36±0.05** | 110.31±9.12** | 0.35±0.07** | 0.61±0.07 | 996.40±66.30* | 8.32±0.58** |
| 乙酰唑胺组 | 0.25±0.04†† | 125.93±12.77† | 0.46±0.03†† | 0.47±0.06 | 1 158.84±75.49†† | 9.56±0.86 |
| 西洛他唑组 | 0.27±0.04†† | 120.70±5.88† | 0.45±0.05† | 0.37±0.06†† | 1 128.81±72.52†† | 10.05±1.85† |
| 组别 | 肾 | ||
|---|---|---|---|
| MDA/(nmol·mg Prot-1) | SOD/(U·mg Prot-1) | GSH/(mg·g Prot-1) | |
| 常氧对照组 | 1.37±0.26 | 562.65±15.89 | 1.59±0.25 |
| 缺氧模型组 | 1.63±0.31 | 396.55±60.13** | 1.25±0.17* |
| 乙酰唑胺组 | 1.32±0.20† | 434.56±38.35 | 1.62±0.26† |
| 西洛他唑组 | 1.28±0.14† | 479.02±35.02†† | 1.80±0.31†† |
MDA：丙二醛；SOD：超氧化物歧化酶；GSH：谷胱甘肽。与常氧对照组比较，*P<0.05，**P<0.01；与缺氧模型组比较，†P<0.05，††P<0.01。
n=6, ±s
2.2.4. 各组HE染色结果比较
光镜下，常氧对照组肺上皮细胞呈空泡薄壁结构；缺氧模型组可见肺泡上皮细胞肿大、肺泡壁增厚，肺泡血管扩张充血，细胞质淡染、炎症细胞浸润；乙酰唑胺组可见肺泡壁增厚，肺泡上皮细胞肿大，细胞质淡染，但较缺氧模型组症状减轻；西洛他唑组未见肺泡壁增厚，组织结构较为正常(图1)。
图1.
各组大鼠肺组织HE染色
Figure 1 HE staining of lung tissues of rats in each group
A: Normoxia control group; B: Hypoxia model group; C: Acetazolamide group; D: Cilostazol group.
常氧对照组心肌纤维排列整齐，无波浪样、空泡或脂肪变性，细胞质染色均匀；缺氧模型组心肌出现撕裂，纤维排列紊乱，呈波浪状，细胞核深染；乙酰唑胺和西洛他唑组心肌纤维排列较为整齐，无波浪样、空泡或脂肪变性，细胞质染色均匀(图2)。
图2.
各组大鼠心肌组织HE染色
Figure 2 HE staining of heart tissues of rats in each group
A: Normoxia control group; B: Hypoxia model group; C: Acetazolamide group; D: Cilostazol group.
常氧对照组、缺氧模型组、乙酰唑胺组、西洛他唑组脑组织均未见明显损伤，海马区锥体细胞层排列整齐，细胞排列密集，偶见深色神经元，未见明显的胶质细胞增生及炎症细胞浸润(图3)。
图3.
各组大鼠脑组织HE染色
Figure 3 HE staining of brain tissues of rats in each group
A: Normoxia control group; B: Hypoxia model group; C: Acetazolamide group; D: Cilostazol group.
常氧对照组肝细胞围绕中央静脉呈放射状排列，未见明显变性坏死；缺氧模型组肝细胞偶见双核，可见少量肝细胞空泡变性或脂肪变性，内含大小不一的空泡或透明脂滴；乙酰唑胺和西洛他唑组可见少量肝细胞脂肪变性(图4)。
图4.
各组大鼠肝组织HE染色
Figure 4 HE staining of liver tissues of rats in each group
A: Normoxia control group; B: Hypoxia model group; C: Acetazolamide group; D: Cilostazol group.
常氧对照组偶见小管排列紊乱，部分肾小管上皮细胞呈扁平状；缺氧模型组可见肾小管上皮细胞水肿，管腔狭窄迂曲，偶见肾小管上皮细胞脱落；乙酰唑胺组有少量上皮细胞脱落；西洛他唑组肾小管上皮细胞水肿减轻，未见明显损伤(图5)。
图5.
各组大鼠肾组织HE染色
Figure 5 HE staining of kidney tissues of rats in each group
A: Normoxia control group; B: Hypoxia model group; C: Acetazolamide group; D: Cilostazol group.
3. 讨 论
西洛他唑主要用于治疗间歇性跛行、慢性脑缺血、脑梗死等，有抑制出血性中风[9]和治疗糖尿病相关微血管并发症的潜力[10]，具有抗血小板聚集、扩张血管、保护血脑屏障、体外增加P50的作用[3]。鉴于此，西洛他唑可能通过增加P50，降低Hb氧亲和力，从而增加血液在组织中的供氧量，缓解高原缺氧损伤。常压密闭缺氧实验显示西洛他唑高、中、低剂量均能延长小鼠的存活时间，且中剂量效果最佳，表明西洛他唑有明显的抗缺氧活性，这与人体临床常用剂量一致。
为了验证西洛他唑对急进高原缺氧所致的机体损伤是否有改善作用，我们采用急进高原大鼠缺氧模型，给予西洛他唑后观察其相关指标，结果发现给予西洛他唑后Hb含量、Hct水平较缺氧模型组降低，提示给药后会缓解由急进高原的低氧刺激导致的大鼠Hb、Hct过度代偿现象，从而降低血液黏稠度、减轻心、肺负担[2]。西洛他唑组P50较缺氧模型组升高，表明急进高原后Hb的氧亲和力会发生变化，组织中释氧增加，这与西洛他唑体外提高P50的结论一致[6]。
炎症因子水平可以提示大鼠机体炎症损伤情况。西洛他唑组的TNF-α、IL-6表达水平较缺氧模型组降低，表明药物干预后大鼠炎症减轻，抑制高原缺氧引起的TNF-α等炎症因子的释放，从而进一步抑制IL-6等的释放，减轻瀑布效应[11]。这一结果与病理结果一致。
急进高原缺氧易引起组织氧化应激损伤及氧化与抗氧化平衡失调。本实验结果显示：西洛他唑组大鼠的各个组织均较缺氧模型组MDA含量降低，SOD活力增强，GSH含量升高。这表明西洛他唑组可减轻由氧自由基引发的脂质过氧化程度，增加清除超氧阴离子自由基的能力，抑制高毒性物质羟基自由基的形成，促进组织修复，减轻组织氧化应激损伤[12-13]。
本研究病理结果显示：与缺氧模型组比较，大鼠急进高原3 d后西洛他唑组肺、心肌和肾组织损伤症状明显减轻。这表明西洛他唑具有减轻缺氧后心肌、肺、肾组织损伤的作用。那么西洛他唑组大鼠在高原低氧环境下相对平原组的相关损伤是否是药物不良反应导致的呢？查阅西洛他唑胶囊说明书可知，治疗剂量下该药物不良反应主要有呼吸系统反应，如咽炎、鼻炎，发生率为7%~12%；心血管系统外周水肿，发生率为7%~9%；偶有肝功能障碍等。人体西洛他唑口服剂量为100 mg/次，2次/d，本实验大鼠给药剂量根据体表面积折算法换算为9 mg/(kg·次)，2次/d，与人体剂量相当，因此不良反应发生率低；其次，说明书中描述的人体神经系统及呼吸系统不良反应无法在本实验的大鼠中体现，进一步降低了不良反应的发生率；同时，氧化应激指标及病理结果显示低氧环境下西洛他唑组大鼠并未加重心肌、肺组织的氧化损伤及病理损伤，表明高原低氧环境下西洛他唑在大鼠体内的不良反应发生率低，且可以减轻相关组织的低氧损伤。因此，西洛他唑组在高原环境下相对平原组的相关损伤不是药物不良反应导致的。
综上所述，西洛他唑能够提高急进高原缺氧大鼠的P50水平，降低主要组织MDA含量、增强SOD活力、增加GSH含量，降低炎症因子IL-6、TNF-α水平，从而减轻大鼠机体缺氧所致的损伤，具有抗缺氧保护作用，有望成为抗高原缺氧的有效药物。我们将在下一步的研究中继续深入探讨其抗缺氧的作用及机制。
基金资助
国家自然科学基金(81673508)；全军医学科技青年培育项目(20QNPY070)。
This work was supported by the National Natural Science Foundation (81673508) and the PLA Youth Training Project for Medical Science (20QNPY070), China.
利益冲突声明
作者声称无任何利益冲突。
作者贡献
李雪 实验设计和实施，数据分析，论文撰写；王荣 实验设计和指导；霍妍、赵安鹏 数据采集和分析；李文斌、封士兰 实验设计，论文审阅及指导。
原文网址
http://xbyxb.csu.edu.cn/xbwk/fileup/PDF/202202202.pdf
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