Abstract
目的
通过对非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）患者血清脂质组学的分析，研究NAFLD的脂质代谢特征。
方法
受试者分为对照组（n=23）、经肝脏病理学证实的NAFLD患者组（n=42），应用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）测定血清脂质组学代谢产物，构建偏最小二乘判别分析（PLS-DA）模型，结合单因素分析差异代谢脂质。对数据进行t检验以及Mann-Whitney U检验。
结果
共检测239种脂质代谢产物并进行定性定量分析，构建PLS-DA模型（R2=0.753，Q2=0.456），结合单因素分析显示，NAFLD患者血清脂质代谢与对照组之间有77种脂质存在明显差异（VIP值＞1，P＜0.05）。其中包括游离脂肪酸、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰肌醇（LPI）、缩醛磷脂酰胆碱（PlsCho）、缩醛磷脂酰乙醇胺（PlsEtn）、神经酰胺（Cer）、鞘磷脂、甘油三酯（TG）等脂质。NAFLD组单不饱和脂肪酸较对照组明显升高（均值较对照组升高39%，t=-3.954，P＜0.05）；NAFLD组TG较对照组升高（均值较对照组升高36%，Z=-2.662，P＜0.01）；且以低碳数目和低不饱和键数目的TG升高为主，而高碳数目以及多不饱和键数目的TG下降；NAFLD组LPI、Cer较对照组升高（均值较对照组分别升高：223%，t=-3.858，P＜0.05；21%，t=-2.481,P＜0.05），而多种缩醛磷脂（PlsCho、PlsEtn）在NAFLD中显著降低（均值较对照组分别下降：18%，t=3.184,P＜0.05；20%，t=2.363,P＜0.05）。
结论
NAFLD血清脂质代谢轮廓与正常人有明显差异，通过NAFLD血清脂质组学的分析可进一步阐明NAFLD的脂质代谢特征。
Keywords: 脂肪肝, 脂质组学, 超高效液相色谱-串联质谱
Abstract
Objective
To investigate the serum lipidomic profile in patients with nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD), and to analyze the lipid metabolism characteristics of NAFLD.
Methods
The subjects were divided into control group (23 patients) and pathologically confirmed NAFLD group (42 patients), and ultra-high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry was used to measure serum lipidomic metabolites. The partial least squares-discriminant analysis (PLS-DA) model was established to analyze the differences in lipid metabolism with reference to the univariate analysis. The t-test and Mann-Whitney U test were used for data analysis.
Results
A total of 239 lipids were identified and qualitative and quantitative analyses were performed. The PLS-DA model (R2=0.753, Q2=0.456) and the univariate analysis showed that 77 lipids were metabolized differentially between the NAFLD group and the control group (VIP＞1, P＜0.05), including free fatty acid, phosphatidylcholine, phosphatidylethanolamine, phosphatidylinositol, lysophosphatidylcholine, lysophosphatidylinositol (LPI), choline plasmalogen (PlsCho), ethanolamine plasmalogen (PlsEtn), ceramide (Cer), sphingomyelin, and triglyceride (TG). Compared with the control group, the NAFLD group had significant increases in monounsaturated fatty acids (increased by 39%, t=-3.954, P＜0.05) and TGs (increased by 36%, Z=-2.662, P＜0.05), mainly TGs with low numbers of carbon atoms and unsaturated bonds, while there were reductions in TGs with high numbers of carbon atoms and unsaturated bonds. In addition, compared with the control group, the NAFLD group had significant increases in the levels of LPI (increased by 223%, t=-3.858, P＜0.05) and Cer (increased by 21%, t=-2.481, P＜0.05) and significant reductions in PlsCho (reduced by 18%, t=3.184, P＜0.05) and PlsEtn (reduced by 20%, t=2.363,P＜0.05).
Conclusion
There is a significant difference in lipid metabolism profile between NAFLD patients and healthy people, and a serum lipidomic analysis of NAFLD helps to further clarify the characteristics of lipid metabolism in patients with NAFLD.
Keywords: Fatty liver, Lipidomics, UPLC-MS/MS
非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）是一种病理学改变与酒精性肝病极其相似但患者并无过量饮酒史的临床综合征，代谢综合征及其组分（肥胖、血脂紊乱、糖尿病）是NAFLD的重要危险因素[1]。NAFLD患者肝细胞内甘油三酯显著增多，同时伴随其他脂质成分和脂质内脂肪酸改变以及血液脂质组学变化。分析人体血液脂质组学改变有助于探讨肝脏脂质代谢及其在NAFLD发病中的作用。为此，本研究通过使用超高效液相色谱-串联质谱（ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry, UPLC-MS/MS）检测NAFLD患者和健康对照成人血清脂质组学，旨在探讨NAFLD患者血液脂质代谢的特点，从而为NAFLD的无创诊断和有效防治提供新思路。
资料与方法
1.研究对象：收集2012年1月至2013年6月来上海交通大学医学院附属新华医院和天津市第二人民医院就诊并经肝活组织检证实的NAFLD患者（病例组），选择同期健康体检者为对照组。病例组入选标准为肝活组织检查确诊NAFLD并符合2010年版《非酒精性脂肪性肝病诊疗指南（2010年修订版）》[1]；排除标准为合并终末期肝病、各种恶性肿瘤、嗜肝病毒现症感染、先天性肝脏疾病、自身免疫性肝病、药物毒物与酒精性肝病。对照组为性别、年龄与NAFLD组匹配，无乙醇滥用（每日饮酒量小于20g乙醇）以及嗜肝病毒感染等病史，肝功能生物化学指标正常，肝脏彩色多谱勒超声和FibroScan检测正常的同期健康体检成人。本研究得到上海交通大学医学院附属新华医院伦理委员会批准，并遵照《赫尔辛基宣言》的原则实施，所有研究对象均签署知情同意书。
2.临床资料收集：常规收集病史资料、人体学指标、血常规、肝功能与肾功能指标、空腹血糖、血脂等实验室指标，以及腹部超声和FibroScan检测的结果。所有NAFLD组患者均签署了肝活组织检查的知情同意书。
3.血清样本的收集及预处理：所有研究对象采样前一天避免剧烈运动，避免饮用乙醇、咖啡、浓茶。采集清晨空腹静脉血清样本，使用甲基叔丁基醚-甲醇提取体系进行预处理，并进行UPLC-MS/MS分析。为评价采集样本的数据质量，质量控制（quality control，Qc）样本穿插在样本分析序列中，本次试验Qc样本来自于健康成人混合血清。
4.UPLC-MS/MS：采用超高效液相色谱（购自美国Waters公司）与四级杆飞行时间串联质谱仪（Triple TOF 5600，购自美国AB Sciex公司）。色谱条件：色谱分离柱UPLC ACQUITY色谱柱（2.1mm×100mm×1.7μm，购自美国Waters公司），柱温55℃，流动相A：乙腈：水为3：2，流动相B：异丙醇：乙腈为9：1，流动相A、B各含10mmol/L的乙酸铵，流速：0.26ml/min。质谱条件：ESI模式，采用正负离子扫描模式。质谱具体参数如下：离子喷雾电压4 500V（-）和5 500V（+），去簇电压100V（-）和100V（+），接口加热器温度为600℃（-）和500℃（+）。
5.数据处理和统计学方法：血清脂质组学数据采用Analyst TF 1.6软件（购自美国AB Sciex公司）采集，原始数据导入Lipid View软件、Peak View软件、Multi Quant软件（购自美国AB Sciex公司）进行脂质的识别定性，生成M/Z、保留时间，进一步定量分析；将校正后的数据导入SIMCA-P13.0（购自瑞典Umetrics AB公司）进行偏最小二乘法判别分析（partial least squares-discriminate analysis, PLS-DA），使用置换检验来检查过拟合情况。根据PLS-DA模型得到变量权重值（VIP＞1）以筛选NAFLD患者血清中显著变化的代谢物。采用SPSS22.0（购自美国SPSS公司）对原始数据进行t检验（正态分布的数据）以及Mann-Whitney U检验（非正态分布数据），以P＜0.05为差异有统计学意义。联合VIP值＞1和P值＜0.05筛选差异脂质。
结果
1.一般情况：共收集NAFLD患者（病例组）42例，健康成人（对照组）23名。对照组与NAFLD组的一般资料见表1。与对照组相比，NAFLD组体质量指数（BMI）、腰围、肝硬度、受控衰减参数，以及血清甘油三酯（TG）、碱性磷酸酶（ALP）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、γ谷氨酰转移酶（GGT）等指标显著升高，两组之间性别、年龄、空腹血糖等指标差异无统计学意义。
表1. NAFLD组与对照组的一般资料比较.
| 组别 | 例数 | 年龄（岁） | 男性[例（%）] | 腰围（cm） | BMI（kg/m2） | LSM（kPa） | CAP（dB/m） | FBG（mmol/L） | ALP（U/L） | GGT（U/L） | ALT（U/L） | AST（U/L） | TBil（μmol/L） | DBil（μmol/L） | TC（mmol/L） | TG（mmol/L） | HDL（mmol/L） | LDL（mmol/L） |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 对照组 | 23 | 38（36～43） | 14（60.8） | 80.96±1.32 | 23.80±0.52 | 4.35（3.48～5.15） | 224（189.0～246.0） | 5.00±0.14 | 69.30±3.87 | 25.47±4.51 | 24.17±2.23 | 21.17±0.93 | 15.63±0.79 | 2.53±0.19 | 4.60±0.18 | 1.37±0.16 | 1.25±0.04 | 2.83±0.15 |
| NAFLD组 | 42 | 34（29～51） | 26（61.9） | 91.41±1.09 | 27.44±0.50 | 7.70（5.40～11.00） | 305（273.5～346.5） | 5.77±0.27 | 90.98±6.20 | 123.59±42.02 | 84.63±9.60 | 50.61±5.20 | 17.52±2.46 | 8.20±2.24 | 4.70±0.15 | 1.90±0.17 | 1.20±0.05 | 2.86±0.10 |
| P值 | — | — | 0.000 | 0.000 | 0.000 | 0.000 | — | 0.004 | 0.025 | 0.000 | 0.000 | — | 0.016 | — | 0.031 | — | — | |
| t或Z值 | — | — | -5.958 | -4.698 | -5.071 | -5.324 | — | -2.966 | -2.322 | -6.136 | -5.577 | — | -2.526 | — | -3.216 | — | — |
注：NAFLD：非酒精性脂肪性肝病；BMI：体质量指数；LSM：肝硬度；CAP：受控衰减参数；FBG：空腹血糖；ALP：碱性磷酸酶；GGT：γ-谷氨酰转移酶；ALT：丙氨酸氨基转移酶；AST：天冬氨酸氨基转移酶；Tbi：总胆红素；Dbil：直接胆红素；TC：总胆固醇；TG：甘油三酯；HDL：高密度脂蛋白；LDL：低密度脂蛋白；正态分布数据采用均数±标准误显示，非正态分布数据采用中位数（四分位数）表示；-：未检验无数据
2.脂质组学多元分析：基于非靶向UPLC-MS/MS分析65例血清样本，共检测239种脂质，Qc样本整体表现稳定，99%离子的峰面积RSD＜30%，表明该方法测定的数据稳定可靠。实验数据经过UV转换后，建立了PLS-DA模型，见图1A，可见NAFLD与对照组血清脂质分布有明显差异，同时置换检验参数：R2=0.753，Q2=0.456（图1B），表明所建模型稳定可靠。在239个变量中，90个VIP＞1；对这些指标进一步行单因素分析显示，两组之间有77个脂质存在明显差异（表2）。
图1. 两组偏最小二乘判别分析得分图和置换检验模型.
A：偏最小二乘判别分析得分图：两组各个样本的脂质组学分布有显著差异；B：置换检验模型得到参数R2=0.753，Q2=0.456，表明模型准确度和预测度良好
表2. NAFLD组与对照组间差异脂质比较.
| 脂质 | Cer 40:1;2 | DAG 34:1 | FFA 12:0 | FFA 16:1 | FFA 18:0 | FFA 20:0 | FFA 22:4 | FFA 22:5 | LPC 18:2 | LPC 20:0 | LPC 20:5 | LPC 24:0 | LPI 18:0 | LPI 20:4 | PC 30:0 | PC 32:1 | PC 34:1 | PC 36:1 | PC 38:2 | PC 38:3 | PC 38:7 | PC 40:4 | PC 40:7 | PC 40:8 | PlsCho 34:2 | PlsCho 34:3 | PlsCho 36:2 | PlsCho 36:3 | PlsCho 36:4 | PlsCho 38:5 | PlsCho 38:7 | PlsCho 40:5 | PlsCho 42:5 | PlsCho 42:6 | PlsCho 44:5 | PlsCho 44:6 | PE 34:1 | PlsEtn 38:6 | PlsEtn 38:7 | PlsEtn 40:8 | PlsEtn 42:7 | PI 32:1 | PI 34:1 | PI 34:2 | PI 36:4 | PI 40:4 | PI 40:5 | PI 40:6 | SM 32:1;2 | SM 34:0;3 | SM 36:0;2 | SM 36:3;2 | SM 42:1;3 | TG 42:1 | TG 44:2 | TG 46:0 | TG 46:1 | TG 46:2 | TG 48:0 | TG 48:1 | TG 48:2 | TG 50:0 | TG 50:1 | TG 50:2 | TG 50:3 | TG 52:0 | TG 52:1 | TG 52:2 | TG 52:3 | TG 54:1 | TG 54:2 | TG 54:7 | TG 54:8 | TG 56:8 | TG 56:9 | TG 58:10 | TG 58:11 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| NAFLD/对照 | 1.362 | 1.879 | 0.765 | 1.781 | 0.801 | 0.656 | 1.725 | 1.719 | 0.798 | 0.702 | 0.783 | 0.728 | 4.113 | 1.976 | 1.792 | 2.096 | 1.404 | 1.303 | 1.300 | 1.534 | 0.848 | 1.539 | 0.747 | 0.675 | 0.634 | 0.786 | 0.73 | 0.754 | 0.855 | 0.786 | 0.835 | 0.748 | 0.77 | 0.752 | 0.786 | 0.740 | 1.809 | 0.709 | 0.813 | 0.715 | 0.767 | 3.917 | 1.635 | 1.541 | 1.625 | 1.553 | 1.366 | 1.289 | 1.311 | 0.756 | 2.429 | 0.819 | 0.783 | 1.390 | 1.384 | 1.687 | 1.599 | 1.320 | 2.307 | 2.464 | 1.914 | 2.575 | 2.673 | 2.072 | 1.550 | 1.823 | 2.675 | 1.617 | 1.341 | 2.045 | 1.694 | 0.515 | 0.466 | 0.637 | 0.489 | 0.565 | 0.462 |
| VIP值 | 1.308 | 1.245 | 1.854 | 1.287 | 2.002 | 2.689 | 1.100 | 1.048 | 1.149 | 1.153 | 1.200 | 1.109 | 1.049 | 2.130 | 1.144 | 1.281 | 1.118 | 1.049 | 1.112 | 1.227 | 1.065 | 1.109 | 1.384 | 1.579 | 1.725 | 1.139 | 1.483 | 1.300 | 1.011 | 1.607 | 1.131 | 1.490 | 1.382 | 1.322 | 1.248 | 1.413 | 1.177 | 1.283 | 1.278 | 1.366 | 1.262 | 1.482 | 1.453 | 1.448 | 1.406 | 1.168 | 1.007 | 1.053 | 1.745 | 1.301 | 1.712 | 1.262 | 1.120 | 1.139 | 1.137 | 1.142 | 1.111 | 1.009 | 1.279 | 1.291 | 1.209 | 1.251 | 1.474 | 1.410 | 1.128 | 1.192 | 1.349 | 1.247 | 1.023 | 1.183 | 1.163 | 1.139 | 1.242 | 1.238 | 1.298 | 1.206 | 1.303 |
| P值 | 0.003 | 0.000 | 0.008 | 0.000 | 0.002 | 0.000 | 0.000 | 0.000 | 0.008 | 0.004 | 0.005 | 0.008 | 0.002 | 0.000 | 0.001 | 0.000 | 0.001 | 0.005 | 0.002 | 0.000 | 0.045 | 0.000 | 0.007 | 0.000 | 0.000 | 0.006 | 0.002 | 0.008 | 0.036 | 0.001 | 0.020 | 0.001 | 0.000 | 0.003 | 0.001 | 0.000 | 0.001 | 0.011 | 0.028 | 0.001 | 0.014 | 0.000 | 0.000 | 0.001 | 0.000 | 0.007 | 0.021 | 0.015 | 0.001 | 0.004 | 0.000 | 0.006 | 0.006 | 0.003 | 0.014 | 0.001 | 0.001 | 0.029 | 0.000 | 0.000 | 0.001 | 0.000 | 0.000 | 0.000 | 0.003 | 0.000 | 0.000 | 0.000 | 0.008 | 0.000 | 0.000 | 0.000 | 0.001 | 0.008 | 0.000 | 0.007 | 0.001 |
| t或Z值 | -3.133 | -3.971 | 2.785 | -4.352 | 3.181 | 5.943 | -3.718 | -3.538 | 2.762 | 2.947 | 2.931 | 2.735 | -3.295 | -7.045 | -3.5 | -4.32 | -3.352 | -2.892 | -3.171 | -3.779 | -2.003 | -3.734 | 2.869 | 4.045 | 4.110 | 2.874 | 3.419 | 2.853 | 2.139 | 3.753 | 2.387 | 3.558 | 3.731 | 3.099 | 3.332 | 3.721 | -3.419 | 2.706 | 2.251 | 3.329 | 2.526 | -5.145 | -4.332 | -3.642 | -4.030 | -3.351 | -2.375 | -2.513 | -3.373 | 2.958 | -5.531 | 2.822 | 2.873 | -3.105 | -3.100 | -3.358 | -3.251 | -2.181 | -4.747 | -4.143 | -3.402 | -4.555 | -4.788 | -4.471 | -3.005 | -4.253 | -4.706 | -3.594 | -2.648 | -4.376 | -3.594 | -3.581 | -3.416 | -2.662 | -3.663 | -2.675 | -3.238 |
注：NAFLD：非酒精性脂肪性肝病；Cer：神经酰胺；DAG：二酰甘油；FFA：游离脂肪酸；LPC：溶血磷脂酰胆碱；LPI：溶血磷脂酰肌醇；PC：磷脂酰胆碱；PlsCho：缩醛磷脂酰胆碱；PE：磷脂酰乙醇胺；PlsEtn：缩醛磷脂酰乙醇胺；PI：磷脂酰肌醇；SM：鞘磷脂；TG：甘油三酯
3.NAFLD患者血清脂质变化：NAFLD组血清总脂质水平较对照组显著升高，其中以TG升高为主，且TG与二酰甘油（diacylglycerol，DAG）的比值较对照组明显升高（图2A、2B）。在NAFLD组中Cer、溶血磷脂酰肌醇（lysophosphatidylinositol, LPI）类脂质较对照组升高（图2C、2D）；而游离脂肪酸、DAG、胆固醇酯等脂质在两组间的差异无统计学意义。在磷脂类物质中，部分分子量的磷脂酰胆碱（phosphatidylcholine, PC）、磷脂酰乙醇胺（phosphatidylethanolamine, PE）、磷脂酰肌醇（phosphatidylinositol, PI），溶血磷脂酰胆碱（lysophosphatidylcholine, LPC）、鞘磷脂（sphingomyelin，SM）类的磷脂与对照组比较，差异有统计学意义（表2），而总体PC、PE、PI、LPC、SM类磷脂与对照组比较，差异并无统计学意义（图2）。NAFLD组缩醛磷脂类较对照组显著下降（图2），几乎所有分子量的缩醛磷脂酰胆碱（choline plasmalogen, PlsCho）和缩醛磷脂酰乙醇胺（ethanolamine plasmalogen, PlsEtn）在NAFLD组中都显著下降（表2）。
图2. NAFLD组与对照组血清脂质类别的比较.
A：两组总脂质及脂肪酸类脂质的比较；B：两组中性脂质的比较；C：两组磷脂及溶血磷脂的比较；D：两组鞘脂和缩醛磷脂类的比较；NAFLD：非酒精性脂肪性肝病；Total lipids：总脂质；SFA：饱和脂肪酸；MUFA：单不饱和脂肪酸；PUFA：多不饱和脂肪酸；FFA：游离脂肪酸；DAG：二酰甘油；TG：甘油三酯；CE：胆固醇酯；PC：磷脂酰胆碱；PE：磷脂酰乙醇胺；PI：磷脂酰肌醇；LPC：溶血磷脂酰胆碱；LPE：溶血磷脂酰乙醇胺；LPI：溶血磷脂酰肌醇；Cer：神经酰胺；SM：鞘磷脂；PlsCho：缩醛磷脂酰胆碱；PlsEtn：缩醛磷脂酰乙醇胺；a NAFLD组与对照组相比，P＜0.05
4.NAFLD患者血清脂肪酸组成的差异：在所有脂质包含的脂肪酸链中，NAFLD组血清单不饱和脂肪酸（monounsaturated fatty acids, MUFA）较对照组显著升高。在升高的TG中，NAFLD组主要以不饱和键数目小于3、碳原子数目较少的TG升高为主（图3A、3B）。图3C清晰地呈现NAFLD组的血清TG相对值随不饱和键数目和碳原子数目的变化呈现阶梯状改变：在相同碳原子数目中，NALFD组TG随不饱和键数目升高而下降，而在相同不饱和键的TG中，NAFLD组TG随碳原子数目升高而下降。
图3. NAFLD患者血清甘油三酯的变化.
注：NAFLD：非酒精性脂肪性肝病；TG：甘油三酯；a：NAFLD组与对照组相比，P＜0.05；A：NAFLD组中不饱和键数目小于3的TG较对照组显著升高；B：NAFLD组中碳原子数目较少的TG较对照组显著升高；C：不同碳原子数目以及不饱和键的TG在每个样本中的变化：TG在NAFLD组随碳原子数目、不饱和键数目增多而减少
讨论
NAFLD的发病机制通常用“二次打击”学说来解释，第一次打击为肝脏脂质代谢失调引起肝细胞TG过度蓄积，而脂毒性代谢产物进一步导致肝细胞线粒体功能失调和内质网应激，并诱导细胞凋亡以及促炎因子和促纤维化因子产生过多，从而形成第二次打击导致非酒精性脂肪性肝炎[2]。脂质组学研究对NAFLD发病机制的阐述提供了独特的视角。有文献报道脂质代谢紊乱是NAFLD患者的重要特征[3, 4]。
NAFLD是代谢综合征累及肝脏的病理表现，胰岛素抵抗在肝脏TG沉积中起到重要作用，有文献指出肝脏内TG的累积在人体内可直接导致胰岛素抵抗[2]。NAFLD患者血液和肝脏内增多的DAG可激活蛋白激酶C导致胰岛素抵抗[5]。本研究中NAFLD患者血清TG显著升高，而DAG升高的差异无统计学意义。TG/DAG的比例在NAFLD组显著升高，提示NAFLD患者体内二酰基甘油转移酶活性升高，而其活性升高可不通过DAG升高而直接引发TG在肝脏蓄积[6]。
有研究者指出，低碳原子数目以及低不饱和键数目的TG与胰岛素抵抗密切相关，高碳原子数目以及多不饱和键数目的TG则与2型糖尿病的发病呈负相关[7]。NAFLD患者肝脂肪变的程度越高，含饱和或者MUFA的TG相对含量也更高[8]。在本研究中，NAFLD患者血清总TG水平较对照组显著升高，且低碳数目和低不饱和键数目的TG较对照组显著升高，而高碳数目以及高不饱和键数目TG显著下降，提示NAFLD患者胰岛素抵抗、高胰岛素血症导致脂质从头合成增多，从而促进肝脏脂质沉积以及高TG血症。而含高碳数目以及高不饱和键数目TG下降意味着长链多不饱和脂肪酸的下降，脂质氧化减少，促进脂质沉积。
本研究结果显示，NAFLD患者血清MUFA的脂质较对照组显著升高，这可能与NAFLD患者硬酯酰辅酶A去饱和酶1活性升高有关。除此之外，Cer和LPI水平在NAFLD组较对照组显著升高。Cer是一种可介导胰岛素抵抗的脂质[9]；而LPI是一种与多种疾病相关的生物活性脂质，与细胞生长和分化相关，并可能参与糖代谢的稳态[10]；但至今鲜见LPI与NAFLD以及脂代谢紊乱相关的研究报道。
脂质过氧化是NAFLD发病机制中的重要环节，而内源性抗氧化剂可避免或者延迟脂质的氧化过程。缩醛磷脂是sn-1位置上含烯醚键的甘油磷脂，相比于其他磷脂，缩醛磷脂更容易与氧化剂反应，起到清除活性氧的作用，是内源性抗氧化剂[11]。在本研究中，NAFLD组血清多种缩醛磷脂的减少可能与NAFLD病理过程中氧化应激的消耗有关。
总之，本研究通过UPLC-MS/MS分析显示NAFLD患者血清脂质代谢稳态发生了显著的变化，主要表现为血清TG、Cer、LPI、缩醛磷脂水平等与健康对照有明显差异。这些血清脂质的改变可进一步导致脂毒性脂质的产生，导致单纯性脂肪肝通过脂质过氧化而发生脂肪性肝炎。进一步探讨不同炎症损伤和纤维化程度的NAFLD患者血清脂质代谢差异，有可能为无创诊断非酒精性脂肪性肝炎和肝纤维化提供新对策。
利益冲突
无
作者贡献声明
杨蕊旭：负责实施研究、采集数据、分析数据、文章撰写；胡春秀、许国旺：负责脂质组学相关技术支持；宓余强、孙婉璐、潘勤、沈峰：负责数据、标本的采集；陈光榆：负责统计学指导；范建高：负责实验设计，指导及支持性贡献，文章审阅、定稿
Funding Statement
基金项目：国家重点基础研究发展计划（973计划，2012CB517501）;国家自然科学基金（81270491、81470840）;上海市科委重点项目（10411956300）;上海市卫生系统优秀学科带头人计划（XBR2011007）
Fund program: National Key Basic Research Program of China(973 Program, 2012CB517501);National Natural Science Foundation of China(81270491、81470840);Key Program of Science and Technology Commission of Shanghai Municipality(10411956300);Program of Shanghai Subject Chief Scientist(XBR2011007)
参考文献
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