Abstract
目的
研究Notch信号通路在急性肝衰竭发生和发展中的作用及其可能的分子机制。
方法
用D-氨基半乳糖腹腔注射小鼠复制急性肝衰竭模型，病理学染色观察肝组织病理学改变，Real time-PCR和Western blot法测定肝组织Jagged1、Notch1、Hes5 mRNA与蛋白质以及NICD蛋白的表达水平，免疫组织化学染色方法检测小鼠肝组织CD68的表达情况，同时测定血清ALT、AST、白细胞介素10（IL-10）、高迁移率族蛋白B1（HMGB1）及血浆脂多糖（LPS）水平。体外培养小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞，用LPS和Notch信号通路特异性阻断剂DAPT进行干预，Real time-PCR和Western Blot法检测细胞Notch1 mRNA、NICD蛋白、Hes5 mRNA和蛋白质的变化，同时检测细胞上清液IL-10和HMGB1水平。两组间比较用t检验，多组间数据比较用单因素方差分析，组间数据比较用q检验。相关性分析采用直线相关分析法。
结果
腹腔注射3.0 g/kg D-氨基半乳糖36 h成功复制BALB/c小鼠急性肝衰竭模型。与正常对照组相比，小鼠急性肝衰竭模型组血清ALT[（848.40±94.83）U/L比（38.99±9.63）U/L]、AST[（911.49±67.65）U/L比（55.28±7.50）U/L]、HMGB1[（101.91±12.43）μg/L比（20.73±5.37）μg/L]、IL-10[（4 627.88±842.45）pg/ml比（1 064.92±238.46）pg/ml]、血浆LPS[（11.80±0.89）EU/ml比（0.58±0.12）EU/ml]、肝组织Jagged1（mRNA：7.63±1.41比1.00±0.00，蛋白质：0.71±0.07比0.34±0.07）、Notch1（mRNA：7.10±0.66比1.00±0.00，蛋白质：0.66±0.11比0.27±0.08）、NICD（蛋白质：0.76±0.08比0.27±0.08）、Hes5（mRNA：7.95±0.71比1.00±0.00，蛋白质：1.20±0.07比0.76±0.07）、CD68（7 685.05±417.34比2 294.01±392.93）水平均明显升高，差异均有统计学意义（t值分别为34.78、50.98、26.68、16.74、47.91、23.04、17.05、35.56、13.25、21.52、38.84和15.73，P值均<0.01）。LPS可显著提高RAW264.7细胞上清液HMGB1[（7.44±0.63）μg/L比（0.21±0.05）μg/L]、IL-10[（315.19±79.13）pg/ml比（59.19±23.30）pg/ml]、细胞Notch1（mRNA：6.49±0.73比1.00±0.00）、NICD（蛋白质：0.65±0.10比0.23±0.07）、Hes5（mRNA：7.30±0.85比1.00±0.00，蛋白质：0.96±0.10比0.54±0.07）水平（q值分别为41.53、13.93、30.18、17.41、31.94和15.20，P值均<0.01），加入DAPT后上述指标水平显著下降（分别为6.22±0.71、252.06±57.63、3.20±0.68、0.42±0.05、4.72±0.67和0.84±0.09，q值分别为7.03、3.44、18.07、9.27、13.08和4.36，P值均<0.05）。
结论
LPS可以通过激活肝脏巨噬细胞内Notch信号通路，促进HMGB1、IL-10的分泌，尤以升高HMGB1水平为主，参与急性肝衰竭的发生和发展。
Keywords: 肝功能衰竭，急性, 脂多糖类, 高迁移率族蛋白质类, 白细胞介素10
Abstract
Objective
To investigate the role of the Notch signaling pathway, and the underlying mechanism, in development of acute liver failure (ALF) in a mouse model.
Methods
For in vivo analysis of the role of Notch signaling in ALF, a mouse model of ALF was generated by intraperitoneal injection of 3.0 g/kg D-galactosamine. Histological specimens were stained by hematoxylin-eosin, and then studied microscopically. Expression level of Jagged1, Notch1, NICD, and Hes5 was measured by western blotting (for protein) and real time-PCR (for mRNA). The level of CD68 protein was detected by immunohistochemical staining. Serum levels of alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), IL-10, high mobility group box 1 (HMGB1) chromatin protein, and lipopolysaccharide (LPS) were measured by standard methods. For in vitro analysis of the molecular mechanism, the RAW264.7 macrophage cell line was cultured with LPS in the absence or presence of the Notch inhibitor DAPT, and the intracellular levels of Notch1, NICD, and Hes5 were measured by western blotting and real time-PCR and the extracellular levels of IL-10 and HMGB1 were detected in the supernatant.
Results
Compared with unmodeled (normal control) mice, the ALF modeled mice showed higher levels of serum ALT (848.40±94.83 U/L vs. 38.99±9.63 U/L), AST (911.49±67.65 U/L vs. 55.28±7.50 U/L), HMGB1 (101.91±12.43μg/L vs. 20.73±5.37μg/L), IL-10 (4 627.88±842.45 pg/mL vs. 1 064.92±238.46 pg/mL) and LPS (11.80±0.89 EU/mL vs. 0.58±0.12 EU/mL), as well as higher expression of Jagged1 (mRNA: 7.63±1.41 vs. 1.00±0.00; protein: 0.71±0.07 vs. 0.34±0.07), Notch1 (mRNA: 7.10±0.66 vs. 1.00±0.00; protein: 0.66±0.11 vs. 0.27±0.08), NICD (protein: 0.76±0.08 vs. 0.27±0.08), Hes5 (mRNA: 7.95±0.71 vs. 1.00±0.00; protein: 1.20±0.07 vs. 0.76±0.07), and CD68 (protein: 7 685.05±417.34 vs. 2 294.01±392.93) (all P<0.01). In vitro, LPS increased the extracellular levels of HMGB1 (7.44±0.63 vs. 0.21±0.05), IL-10 (315.19±79.13 vs. 59.19±23.30) and the intracellular expression of Notch1 (mRNA: 6.49±0.73 vs. 1.00±0.00), NICD (protein: 0.65±0.10 vs. 0.23±0.07), and Hes5 (mRNA: 7.30±0.85 vs. 1.00±0.00; protein: 0.96±0.10 vs. 0.54±0.07) (all P<0.01). DAPT treatment led to a decrease above the index serum levels of HMGB1 (6.22±0.71) and IL-10 (252.06±57.63), and of expression of Notch1 (mRNA: 3.20±0.68), NICD (protein: 0.42±0.05), and Hes5 (mRNA: 4.72±0.67; protein: 0.84±0.09) (P<0.01 or<0.05).
Conclusion
The Notch signaling pathway may plan an important role in the development of ALF upon activation of the pathway in macrophages by LPS and leading to promoted secretion of HMGB1 and IL-10, with a greater effect on the former.
Keywords: Liver failure, acute; Lipopolysaccharides; High mobility group proteins; Interleukin-10
急性肝衰竭（acute liver failure, ALF）是肝衰竭的一种亚型，起病急、死亡率高，发病2周内出现Ⅱ度以上肝性脑病。其发病机制复杂，现已明确内毒素血症在ALF的疾病进展中发挥着重要作用。内毒素的主要成分为脂多糖（lipopolysaccharide, LPS），其主要效应细胞是单核巨噬细胞。有学者发现LPS可激活巨噬细胞内Notch信号通路发挥多种生物学功能，可能与抗炎因子白细胞介素10（interleukin-10, IL-10）和晚期炎症介质高迁移率族蛋白B1（high mobility group protein B1, HMGB1）有关。本研究通过D-氨基半乳糖腹腔注射小鼠建立急性肝衰竭模型，体外培养小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞，同时应用LPS和Notch信号通路特异性阻断剂DAPT对细胞进行干预，比较干预前后Notch信号通路相关指标的变化，进一步探讨LPS、Notch信号通路和急性肝衰竭之间的关系。
材料与方法
1.试剂与材料：DMEM高糖培养基购自美国Gibco公司；胎牛血清购自以色列Biological Industries公司；LPS购自美国Sigma公司；二甲基亚砜（DMSO）购自美国Amresco公司；DAPT购自美国Selleck公司；胰蛋白酶（即用型）购自北京华美生物工程公司；D-氨基半乳糖购自美国Sigma公司；Trizol试剂、cDNA合成试剂盒均购自美国Nitrogen公司；Jagged1、Notch1、Hes5和3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）基因引物均购自上海英潍捷基贸易有限公司；小鼠HMGB1酶联免疫吸附（ELISA）试剂盒购自美国R&D Systems公司；IL-10 ELISA试剂盒购自联科生物有限公司；显色基质鲎试剂盒购自厦门市鲎试剂实验厂有限公司；CD68抗体购自Bilged公司；Jagged1抗体购自Epitomic公司；Notch1、Hes5抗体均购自天津赛尔公司；胞内段（notch intracellular domain, NICD）抗体购自美国CST公司；β-肌动蛋白抗体和电化学发光液均购自美国Santa Cruz公司。
2.模型的制备：健康清洁级6~8周龄雄性BALB/c小鼠20只，体质量（18~20）g，购自河北医科大学动物实验中心。标准饲料喂养1周后，将小鼠随机分为正常对照组（10只）和模型组（10只）。模型组于1周末腹腔注射3.0 g/kg D-氨基半乳糖（以等渗盐水溶解，浓度为60 mg/ml），正常对照组则给予同等剂量的等渗盐水腹腔注射，36 h处死全部小鼠。留取血清、血浆及肝组织标本。
3.血清、血浆指标检测：用日本Olympus AU2700全自动生物化学分析仪检测血清ALT和AST。HMGB1、IL-10水平采用双抗体夹心ELISA法测定。血浆LPS应用显色基质鲎试剂盒检测。
4.病理学检测：HE染色观察肝组织普通病理变化。
5.Real time-PCR法检测肝组织Jagged1、Notch1和Hes5的mRNA表达：采用Trizol一步法提取肝组织总RNA，进行cDNA的合成和基因片段的扩增，以GAPDH为内参照，引物序列及PCR反应条件见表1。根据待测基因与管家基因的Ct值，用RQ值（2-△△Ct）表示待测基因的相对表达量。
表1. 实时荧光定量-聚合酶链反应引物序列.
| 基因名称 | 引物序列 | 产物大小（bp） | 变性温度（℃） |
|---|---|---|---|
| Jagged1 | 上游：5'-AGCTCACTTATTGCTGCGGT-3' | 153 | 54 |
| 下游：5'-CCGCTTCCTTACACACCAGT-3' | |||
| Notch1 | 上游：5'-GCTCCGAGGAGATCAACGAG-3' | 268 | 57 |
| 下游：5'-TTGACATCACCCTCACACCG-3' | |||
| Hes5 | 上游：5'-TCCTTTGTATGGGTGGGTGC-3' | 81 | 60 |
| 下游：5'-CAGCCTGTGTTCTCCCACAT-3' | |||
| 3-磷酸甘油醛脱氢酶 | 上游：5'-TTGCAGTGGCAAAGTGGAGA-3' | 173 | 57 |
| 下游：5'-CTCGCTCCTGGAAGATGGTG-3' |
6.Western blot法检测Jagged1、Notch1、NICD及Hes5的蛋白表达水平：提取肝组织蛋白，电泳、转膜、封闭后，加第一抗体、第二抗体，化学发光、曝光、显影后，扫描图片，应用BIO-PROFIF图像分析系统分析条带。
7.细胞培养与标本收集：小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞购自中国医学科学院基础医学研究所基础医学细胞中心。将处于对数生长期的RAW264.7细胞接种在6孔板中，每孔5×105个细胞，用含10%胎牛血清和90%高糖DMEM培养，待细胞长至70%融合时随机分为3组。对照组：DMSO（剂量与LPS+DAPT组相同）培养24 h后，加入磷酸盐缓冲液（剂量与LPS组相同）继续培养30 h；LPS组：DMSO（剂量与LPS+DAPT组相同）培养24 h后，加入LPS（100 ng/ml）继续培养30 h；LPS+DAPT组：DAPT（加入1.2 ml DMSO配成10 mmol/L，用时稀释至10 μmol/L,）培养24 h后[1]，加入LPS（100 ng/ml）继续培养30 h；收取细胞及上清液。
8.用ELISA法检测细胞上清液HMGB1和IL-10水平，方法同体内试验。
9.Real time-PCR和Western blot法分别检测各组RAW264.7细胞中Notch1 mRNA、NICD蛋白以及Hes5的mRNA和蛋白的表达，方法同体内试验。
10.统计学方法：用SPSS 13.0统计软件分析实验数据。数据以均数±标准差（
±s）表示，两组间比较用t检验，多组间数据比较用单因素方差分析，组间数据比较用q检验。相关性分析采用直线相关分析法。P<0.05为差异有统计学意义。
结果
1.血清、血浆指标的变化：ALF模型组小鼠血清ALT、AST、HMGB1、IL-10和血浆LPS水平均高于正常对照组（t值分别为26.85、39.78、18.96、12.87和39.64，P值均<0.01），见表2。
表2. 各组小鼠血清及血浆相关生物化学指标水平（ ±s）.
| 组别 | 动物数（只） | ALT（U/L） | AST（U/L） | HMGB1（μg/L） | IL-10（pg/ml） | LPS（EU/ml） |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 正常对照组 | 10 | 38.99±9.63 | 55.28±7.50 | 20.73±5.37 | 1064.92±238.46 | 0.58±0.12 |
| 模型组 | 10 | 848.40±94.83a | 911.49±67.65a | 101.91±12.43a | 4627.88±842.45a | 11.80±0.89 a |
| t值 | 26.85 | 39.78 | 18.96 | 12.87 | 39.64 | |
| P值 | <0.01 | <0.01 | <0.01 | <0.01 | <0.01 |
注：HMGB1：高迁移率族蛋白B1；IL-10：白细胞介素10；LPS：脂多糖；a ：与正常对照组比较，P <0.01
2.肝组织病理学变化：正常对照组小鼠肝小叶结构完整，肝细胞大小一致，呈多边形围绕中央静脉呈放射状分布。ALF模型组小鼠肝组织正常结构被破坏，肝索结构紊乱，可见大面积肝细胞坏死及大量炎性细胞浸润，残存肝细胞肿胀，呈气球样变，见图1。
图1. 各组小鼠肝组织病理改变HE×200.
A：正常对照组；B：模型组
3.肝组织Jagged1、Notch1、Hes5 mRNA和蛋白以及NICD、CD68蛋白的表达变化：ALF模型组肝组织Jagged1、Notch1、Hes5 mRNA和蛋白以及NICD、CD68蛋白水平增加，与正常对照组比较，差异有统计学意义（t值分别为14.88、11.97、29.09、8.76、31.14、13.69、13.76和29.74，P<0.01）。见表3，图2、图3。
表3. 各组小鼠肝组织Jagged1、Notch1、Hes5 mRNA和蛋白、NICD及CD68蛋白的相对表达量变化（ ±s）.
| 组别 | 动物数（只） | Jaggedl mRNA | Jaggedl蛋白 | Notchl mRNA | Notchl蛋白 | Hes5 mRNA | Hes5蛋白 | NICD蛋白 | CD68蛋白 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 正常对照组 | 10 | 1.00±0.00 | 0.34±0.07 | 1.00±0.00 | 0.27±0.08 | 1.00±0.00 | 0.76±0.07 | 0.27±0.08 | 2 294.01±392.93 |
| 模型组 | 10 | 7.63±1.41a | 0.71±0.07a | 7.10±0.66a | 0.66±0.11a | 7.95±0.71a | 1.20±0.07a | 0.76±0.07a | 7685.05±417.34a |
| t值 | 14.88 | 11.97 | 29.09 | 8.76 | 31.14 | 13.69 | 13.76 | 29.74 | |
| P值 | <0.01 | <0.01 | <0.01 | <0.01 | <0.01 | <0.01 | <0.01 | <0.01 |
注： a ：与正常对照组比较，P值均<0.01
图2. 各组小鼠肝组织CD68蛋白的表达水平IHC×200.
A：正常对照组；B：模型组
图3. 肝组织中Jagged1、Notch1、NICD、Hes5蛋白的表达水平.
注：N：正常对照组；M：模型组
4.小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞上清液中HMGB1、IL-10水平变化：LPS组细胞上清液中HMGB1、IL-10水平均较正常对照组明显增加（q值分别为41.53和13.93，P值均<0.01）；DAPT干预后，上述指标水平均显著下降（q值分别为7.03和3.44），差异有统计学意义（P值均<0.05），见表4。
表4. 各组RAW264.7细胞中Notch1 mRNA、NICD蛋白、Hes5的mRNA和蛋白的相对表达量以及细胞上清液HMGB1、IL-10水平的变化（±s）.
| 组别 | Notch1 mRNA | NICD蛋白 | Hes5 mRNA | Hes5蛋白 | HMGB1（μg/L） | IL-10（pg/ml） |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 正常对照组 | 1.00±0.00 | 0.23±0.07 | 1.00±0.00 | 0.54±0.07 | 0.21±0.05 | 59.19±23.30 |
| LPS组 | 6.49±0.73a | 0.65±0.10a | 7.30±0.85a | 0.96±0.10a | 7.44±0.64a | 315.19±79.13a |
| LPS+DAPT组 | 3.20±0.68ab | 0.42±0.05ab | 0.84±0.09ab | 6.22±0.71ab | 252.06±57.63ac | |
| F值 | 230.64 | 75.86 | 257.90 | 61.21 | 494.11 | 52.69 |
| P值 | <0.01 | <0.01 | <0.01 | <0.01 | <0.01 | <0.01 |
注：HMGB1：高迁移率族蛋白B1；IL-10：白细胞介素10；a ：与正常对照组比较，P值均<0.01；b ：与LPS组比较，P值均<0.01；c ：与LPS组比较，P值均<0.05；与正常对照组比较，q值分别为30.18、17.41、31.94、15.20、41.53和13.93；与LPS组比较，q值分别为13.08、4.36、7.03、3.44、18.07和9.27
5.小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞Notch1 mRNA、NICD蛋白、Hes5的mRNA和蛋白的表达变化：LPS组细胞Notch1 mRNA、NICD蛋白、Hes5的mRNA和蛋白相对表达量均较正常对照组明显增加（q值分别为30.18、17.41、31.94和15.20，P值均<0.01）；DAPT干预后，上述指标水平均显著下降（q值分别为18.07、9.27、13.08和4.36），差异有统计学意义（P值均<0.05）。见表4，图4。
图4. 各组RAW264.7细胞中NICD、Hes5蛋白的表达水平.
6.相关性分析：小鼠血浆LPS水平与ALT、AST、Jagged1 mRNA、Notch1 mRNA、Hes5 mRNA、Jagged1蛋白、Notch1蛋白、NICD蛋白、Hes5蛋白、血清HMGB1、IL-10水平及肝组织CD68蛋白的表达水平均呈正相关，相关系数分别为0.977、0.988、0.968、0.985、0.983、0.925、0.906、0.967、0.955、0.967、0.940、0.985（P值均<0.01）。小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞上清液中HMGB1水平与Notch1 mRNA、Hes5 mRNA、NICD蛋白和Hes5蛋白均呈正相关，相关系数分别为0.849、0.933、0.833、0.866（P值均<0.01）；细胞上清液中IL-10水平也与Notch1 mRNA、Hes5 mRNA、NICD蛋白和Hes5蛋白呈正相关，相关系数分别为0.798、0.810、0.821、0.834（P值均<0.01）。
讨论
ALF进展迅猛，预后极差，病死率极高，已成为最具挑战性的临床医学重点难点问题，内毒素血症是其发病机制之一。本实验以腹腔注射3.0 g/kg的D-氨基半乳糖成功复制小鼠急性肝衰竭模型，发现模型组肝组织炎症坏死程度严重，血浆LPS水平明显升高，且与AST、ALT水平正相关，提示血浆LPS水平在一定程度上可间接反映肝脏损伤程度，在ALF的发生和发展中发挥着关键作用。
Notch信号通路进化上高度保守，在哺乳动物中主要有4种受体（Notch1-4）和5种配体（Delta-like1，3，4、Jagged1，2）组成。Notch信号通路被激活后，γ-分泌酶水解、酶切Notch的跨膜区，释放受体NICD进入细胞核，启动下游基因如Hes（Hes1、Hes5）家族等碱性螺旋环家族蛋白的表达，从而发挥多种生物学效应[2,3]。LPS可激活Notch信号通路调控炎症相关因子的分泌。目前关于Notch信号通路与炎症关系的研究尚存在争议，尤其是对IL-10的影响，有研究显示Notch信号通路可促进IL-10的分泌[4,5,6]，但也有研究持相反的观点[7]。此外，最近研究还发现LPS激活巨噬细胞Notch信号通路与HMGB1的分泌有关。HMGB1是内毒素血症中重要的晚期炎症介质，与白细胞介素1、肿瘤坏死因子等早期炎性因子不同，通常在疾病的稍晚期（12~18 h）产生，并可以维持较长时间（72 h），是疾病后期的主要致病因素[8,9]，推测HMGB1在ALF的进展中也发挥着举足轻重的作用。本研究发现ALF模型组小鼠血清HMGB1、IL-10水平及肝组织Notch信号相关指标的表达量明显升高，并以HMGB1升高为主，且与血浆LPS水平呈正相关，提示LPS激活Notch信号通路调控炎症相关因子HMGB1、IL-10的分泌可能是ALF的发病机制之一。
CD68是一种高度糖基化的膜蛋白，主要位于细胞质内，与细胞内吞及胞内转运有关。当巨噬细胞活化时，CD68表达增加，被认为是巨噬细胞活化的标志物[10]。本研究发现小鼠肝组织CD68蛋白与血浆LPS水平呈正相关，在ALF模型组CD68蛋白的表达量明显升高，提示肝脏内的巨噬细胞活化可能与血浆LPS水平升高有关。
巨噬细胞是LPS的主要效应细胞。本研究分别应用LPS、LPS+DAPT（DAPT是一种新型γ-分泌酶抑制剂，可有效减少NICD的产生和Hes家族蛋白的表达）干预小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞，发现LPS干预后细胞内Notch信号相关指标水平明显升高，提示LPS可激活巨噬细胞内Notch信号转导通路。应用ELISA方法检测出HMGB1、IL-10在正常RAW264.7细胞上清液中有少量表达，加入LPS刺激后二者水平均明显升高，且均与Notch信号通路相关指标成正比，说明LPS激活巨噬细胞内Notch信号通路可促进HMGB1、IL-10的分泌。应用10μmol/L DAPT干预后发现，以相同剂量LPS刺激RAW264.7细胞，细胞内Notch信号相关指标水平明显降低，表明Notch信号通路被有效抑制。此外，还发现细胞上清液中HMGB1、IL-10水平亦下降显著，提示二者的分泌与Notch信号通路有关，从而进一步证实Notch信号通路是LPS刺激巨噬细胞分泌HMGB1和IL-10的关键调控因素。
本研究中LPS激活巨噬细胞内Notch信号通路，可同时促进致炎因子HMGB1和抗炎因子IL-10的分泌，产生这一看似矛盾结果的原因是机体内存在促炎与抗炎平衡的自我调节机制。在疾病的初期，促炎细胞因子水平轻度升高。随着外界刺激的持续存在，促炎细胞因子的分泌进一步增加，此时体内抗炎细胞因子水平也会相应升高，以抵抗炎性因子对机体自身造成的伤害；在疾病的后期，瀑布式炎症级联反应导致大量炎性因子释放，机体分泌的抗炎细胞因子不足以抵抗炎性因子的致炎作用，抗炎与促炎平衡被打破，从而加重组织损伤，最终导致病情恶化。由此可见，Notch信号通路调控炎症相关因子的分泌是机体的一种自我调节机制。本研究中，LPS刺激巨噬细胞内Notch信号通路分泌HMGB1和IL-10，其中以HMGB1升高为主，提示在LPS持续升高的晚期，巨噬细胞内Notch信号通路分泌的抗炎因子IL-10不足以抵抗大量释放的HMGB1的致炎作用，从而对细胞造成损伤。应用DAPT进行阻断后发现，二者水平均明显下降，进一步证实LPS激活Notch信号通路主要发挥致炎作用。
总之，内毒素血症是ALF发病机制之一，由肠道菌群异位导致血浆LPS水平的升高可激活肝脏巨噬细胞内Notch信号通路，调控炎性介质如HMGB1、IL-10的分泌，其中以促炎因子HMGB1升高为主，从而加重肝脏损伤，参与ALF的疾病进展。这就为今后临床探索急性肝衰竭的治疗靶点提供新的思路和方向。
参考文献
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