肠型脂肪酸结合蛋白和粪钙卫蛋白联合检测在足月新生儿坏死性小肠结肠炎中的应用价值

Abstract

目的

探讨肠型脂肪酸结合蛋白（I-FABP）、粪钙卫蛋白（FC）联合检测在足月新生儿坏死性小肠结肠炎（NEC）诊断中的应用价值。

方法

选择足月新生儿NEC36例（病例组）和同期非消化系统疾病新生儿39例（对照组）为研究对象。采用酶联免疫吸附法（ELISA）分别检测两组患儿血清I-FABP及粪便中FC的水平，并评估I-FABP联合FC诊断NEC的临床价值。

结果

病例组I-FABP和FC显著高于对照组（P < 0.05）；病例组患儿血清I-FABP与粪便中FC呈现正相关（r=0.71，P < 0.05）；分别以I-FABP、FC及两指标联合为参考，诊断NEC的敏感性分别为83.3%，81.5%和79.5%；特异性分别为72.5%，75.8和86.3%，诊断的ROC曲线下面积（AUC）分别为0.82，0.81和0.88。联合检测诊断NEC的特异性和AUC明显高于单一检测（P < 0.05）。

结论

I-FABP与FC在NCE患儿显著升高，且两者存在相关性，联合检查可提高诊断NEC的特异性。

新生儿坏死性小肠结肠炎（necrotizing enterocolitis, NEC）是临床上常见的一类新生儿消化系统疾病，好发于早产儿。NEC主要表现为腹胀、呕吐、便血和腹部X线平片部分肠壁囊样积气等，其病理学特征为肠黏膜甚至肠深层组织的坏死^[1]。目前，NEC确切发病机制并未完全阐明，可能与患儿肠粘膜血液供应减少、缺血缺氧及喂养不当或细菌感染有关^[2]。NEC早期症状多不典型，容易漏诊或误诊，患儿死亡率较高。因此，探寻NEC诊断及病情评估的生物标志物是研究热点。既往文献报道肠型脂肪酸结合蛋白（intestinal fatty acid binding protein, I-FABP）和粪钙卫蛋白（fecal calprotectin, FC）在早产新生儿NEC早期往往升高，可作为NEC诊断的标志物^[3-4]。但I-FABP与FC水平在足月新生儿NEC中的研究较少。目前国内外也未见有关FC与I-FABP联合检查对足月新生儿NEC的诊断价值的报道。因此，本研究选择足月新生儿NEC为研究对象，探讨I-FABP联合FC检测在足月新生儿NEC诊断中的应用价值，以期为临床工作提供依据。

1. 资料与方法

1.1. 研究对象

选择2012年2月至2015年11月本院收治的足月新生儿NEC 36例（病例组）为研究对象。

纳入标准：（1）符合NEC诊断标准^[5]（①肠道症状和体征：胃残奶增加；中腹部膨胀呕吐咖啡样物；粪便带血、黑边或大便潜血阳性；肠鸣音消失；腹部可有压痛。②全身症状和体征：体温不稳定；呼吸暂停或深情萎靡；代谢性酸中毒或血小板减低。③腹部X线平片：肠充气或功能性梗阻；肠胀气肠壁囊样积气体；或有腹水）；

（2）为足月新生儿；（3）患儿血液等标本的获取经家属签署知情同意书。

排除标准：（1）诊断不明确或可疑NEC患儿；（2）非足月新生儿；（3）低或极低出生体重儿；（4）合并其他消化系统疾病患儿（如腹泻、中毒性巨结肠等），合并其他感染性疾病患儿，HIV及其他传染性疾病患儿。

另选取同期非消化系统疾病、非感染性疾病足月新生儿39例作为对照组。

1.2. 研究方法

（1）标本留取  两组患儿于明确诊断后抽取头皮或上肢静脉血2 mL，室温放置2 h后置入离心管中2 000转/min离心10 min，吸取上层血清置于EP管中并保存在-80℃冰箱中待测。大便标本采用无菌一次性粪便收集器收集大便0.5 g并保存于4℃冰箱中待检。

（2）标本检测  应用酶联免疫吸附法对两组血清I-FBAP、C反应蛋白（CRP）及大便CF进行定量检测，试剂盒购自上海酶联生物研究所和上海天呈医药有限公司。将置于-80℃的两组血清于4℃下解冻后，根据试剂盒操作说明对样品进行处理，在加终止液后15 min以内上机检测。选取450 nm波长测量各样本的光密度（A值），以标准物的浓度为纵坐标，A值为横坐标，绘出标准曲线，根据样品的A值由标准曲线查出相应的浓度，再乘以稀释倍数得出各样本中I-FBAP和CRP浓度。大便FC的检查根据试剂盒说明进行

1.3. 统计学分析

采用Stata 8.0软件进行相关数据分析，计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用Student-t检验，相关性检验采用Pearson相关检验，P < 0.05为差异有统计学意义。

2. 结果

2.1. 两组临床资料比较

两组患儿的临床基本资料情况详见表 1，病例组与对照组差别无统计学意义（P > 0.05），组间具有可比性。对照组患儿中原发病为先天性心脏病14例，新生儿黄疸12例，新生儿窒息10例，新生儿气胸2例，新生儿膈疝1例。病例组患儿中NECⅠ期17例，Ⅱ期19例。

1.

两组临床资料比较[（x±s）或n（％）]

2.2. 两组I-FABP及FC比较

病例组血清I-FABP和大便FC分别为4.3±2.9 ng/mL和64±39 ng/mL，明显高于对照组（2.2±0.9 ng/mL，21±17 ng/mL），差别有统计学意义（t值分别为4.31和6.33，均P < 0.05），见图 1。

1.

两组患儿I-FABP及FC水平比较

a示与对照组比较，P < 0.05。

2.3. 病例组I-FABP与FC相关性

病例组患儿血清I-FABP与粪便中FC水平呈现正相关（r=0.71，P < 0.05），见图 2。

2.

I-FABP与FC相关性

2.4. I-FABP与FC联合诊断NEC的价值

分别以I-FABP、FC及两指标联合为参考，诊断NEC的敏感性分别为83.3%，81.5%和79.5%；特异性分别为72.5%，75.8和86.3%，诊断的ROC曲线下面积（AUC）分别为0.82，0.81和0.88。联合检测诊断NEC的特异性和AUC明显高于单一检测，见图 3。

3.

I-FABP与FC联合诊断NEC的价值

3. 讨论

NEC为新生儿科常见的消化道疾病之一，患儿病情往往较重，诊治不及时可导致预后不良。目前研究显示其发病可能与新生儿缺氧、感染及喂养不当有关^[6-7]。NEC起病急骤，患儿临床上主要表现为腹胀、肠鸣音减弱、呕吐、腹泻、便血及全身中等毒症状^[8]。目前，NEC的诊断主要依靠临床表现和医师临床经验，但由于NEC早期临床症状不典型，容易与其他新生儿常见疾病如肠套叠和急性肠炎等混淆，因而容易发生误诊。近年来文献报道I-FABP和FC在早产NEC患儿显著升高，可作为判断NEC发生的标志物^[9-12]。同时本课题组前期研究结果显示，足月NEC患儿血清I-FABP水平在NCE早期（Ⅰ期）已明显升高，且I-FABP升高水平与患儿病情的严重程度存在相关性，Ⅱ~Ⅲ期组显著高于Ⅰ期患儿；以I-FABP判断NEC的敏感性为80.49%，特异性为70.19%^[4]。

FC是从中性粒细胞中分离鉴定的一类组织细胞特异性表达的蛋白，因其能够与钙离子结合而得名^[13]。FC能够反映体内白细胞的活化状态，体现机体炎症水平。文献报道，FC在大便中的表达水平是外周血中的6倍，因而检测粪便中FC的水平能够较为准确的反映肠道的炎症水平^[14]。文献报道，NEC患儿粪便中FC的水平明显升高，可作为诊断NEC的标志物^{[3, 14]}。李红新等^[3]报道，在极低出生体重NEC患儿中，粪便中FC水平在疾病早期即明显升高，可作为诊断极低出生体重患儿NEC的生物标记物。但因围产期缺氧可导致FC的增高^[15]，而缺氧也是NEC的高危因素，两者可能造成混杂，因此单独检测FC组作为NEC的诊断指标可能存在一定的局限性。

I-FABP和FC在足月新生儿NEC中均明显升高，但两种指标联合检查对NEC的诊断价值如何，目前国内外未见报道。本研究发现，NEC患儿血清I-FABP和大便FC显著高于对照组，且患儿血清I-FABP与粪便中FC水平呈现正相关。提示I-FABP与FC在判断NEC方面一致性较好。同时本研究发现，以I-FABP、FC及两指标联合为参考，诊断NEC的敏感性分别为83.3%，81.5%和79.5%；特异性分别为72.5%, 75.8和86.3%, AUC分别为0.82，0.81和0.88，显示联合检测诊断NEC的特异性和AUC明显高于单一检测，但联合检查的敏感性有所降低。提示I-FABP与FC联合检测可提高诊断NEC的特异性。

但本研究纳入患儿均来自单一医疗单位，可能存在选择性偏倚，同时纳入患儿例数相对较少，可能无法代表所有NEC患儿的I-FABP及FC水平及临床特征。另外，本临床试验研究未采用盲法。上述研究局限性可能对研究结论产生一定的影响，导致研究结果的稳定性有待大样本多中心前瞻性临床研究进一步证实。

Biography

田云粉, 女, 硕士, 主治医师

Funding Statement

云南省应用基础研究计划面上项目（项目编号：2012FB204）