Abstract
目的
探讨血浆miR-1290表达水平对口腔鳞状细胞癌（OSCC）患者预后预测的价值。
方法
选取2014年1月—2018年12月儋州市人民医院收治的OSCC患者70例，采用实时荧光定量聚合酶链反应检测OSCC患者血浆miR-1290表达水平。通过ROC曲线确定血浆miR-1290表达水平的最佳界值，并以此为标准将OSCC患者分为高miR-1290组（n=31）和低miR-1290组（n=39），对2组临床病理特征进行比较。应用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，采用单因素及多因素COX回归模型分析影响OSCC患者预后不良的危险因素。
结果
OSCC组血浆miR-1290表达水平（0.65±0.14）明显低于对照组（2.06±0.90），二者间差异有统计学意义（t=13.912，P<0.001）。血浆miR-1290低表达与OSCC患者的临床分期、分化程度、肿瘤直径及淋巴结转移有关（P<0.05）。生存分析显示，低miR-1290组患者总生存率和无进展生存率明显低于高miR-1290组（P<0.01）。多因素COX回归模型分析显示，临床分期、淋巴结转移及血浆miR-1290<1.14是影响OSCC患者预后不良的独立危险因素（P<0.05）。
结论
OSCC患者血浆miR-1290表达水平明显降低，miR-1290低表达与OSCC患者生存期短有关，可能是预测OSCC预后不良的潜在标志物。
Keywords: 口腔鳞状细胞癌, miR-1290, 预后预测
Abstract
Objective
To investigate the prognostic value of plasma miR-1290 in patients with oral squamous cell carcinoma (OSCC).
Methods
Seventy patients with OSCC admitted to Danzhou People's Hospital from January 2014 to December 2018 were included in this study. Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction (PCR) was used to detect the expression of miR-1290 in these patients. The optimal cut-off value of plasma miR-1290 expression was determined by the ROC curve method, and patients with OSCC were divided into the high (n=31) and low (n=39) miR-1290-expressing groups. The clinicopathological features of the two groups were compared, and survival curves were drawn using the Kaplan–Meier method. Risk factors affecting the poor prognosis of patients were analyzed using univariate and multivariate COX regression models.
Results
The expression level of plasma miR-1290 in the OSCC group was significantly lower than that in the control group (0.65±0.14 vs. 2.06±0.90; t=13.912, P<0.001). The low expression of plasma miR-1290 appeared to be related to the clinical stage, differentiation degree, tumor diameter, and lymph node metastasis of OSCC (P<0.05). Survival analysis showed that the overall survival rate and the progression-free survival rate of the low-miR-1290 group were significantly lower than that of the high-miR-1290 group (P<0.01). Multivariate COX regression analysis showed that clinical stage, lymph node metastasis, and plasma miR-1290<1.14 were independent risk factors for the poor prognosis of patients with OSCC (P<0.05).
Conclusion
The expression level of plasma miR-1290 in patients with OSCC significantly decreased, and the low expression of miR-1290 is related to the short survival time of OSCC patients. Thus, miR-1290 may be a potential marker predicting the poor prognosis of OSCC.
Keywords: oral squamous cell carcinoma, miR-1290, prognostic prediction
口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma，OSCC）是一种常见的口腔恶性肿瘤，近年来OSCC的治疗取得了很大的进展，但其致死率仍然居高不下[1]。微小核糖核酸（microRNA，miRNA）作为一种内源性、非编码小分子RNA，参与肿瘤细胞增殖、分化、凋亡、浸润及转移等过程，在OSCC的发生发展中起到重要的作用[2]。近年来研究[3]发现，miR-1290在OSCC患者中异常表达，能通过调控多种信号通路参与OSCC的发生发展，并可能成为治疗OSCC的一个新靶点。本研究通过检测OSCC患者血浆miR-1290表达水平，分析其表达与OSCC患者预后的关系，旨在为OSCC患者的预后预测及靶向治疗提供参考依据。
1. 材料和方法
1.1. 研究对象
选取2014年1月1日—2018年12月31日儋州市人民医院收治的OSCC患者70例，其中男性46例，女性24例，年龄38~73岁，平均年龄（57.40±8.26）岁。纳入标准：1）手术切除并经病理检查证实为原发性OSCC患者；2）初次确诊，且临床资料完整者。排除标准：1）病例资料不完整者；2）术前已行放疗、化疗或生物免疫治疗者；3）术前有感染性疾病、自身免疫性疾病及合并其他恶性肿瘤者。另选取同期来儋州市人民医院健康体检的正常者40例作为对照组，其中男性26例，女性14例，年龄40~72岁，平均年龄（56.80±8.15）岁。2组性别、年龄及体质指数等一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），组间具有可比性。
1.2. 方法
采用前瞻性研究方法，通过电话或门诊等方式对70例OSCC患者进行随访，随访起始于术后第1天，截止时间为2019年10月31日。随诊间隔时间为3个月。总生存时间定义为术后第1天至患者死亡的时间。无进展生存时间定义为术后第1天起，未发生复发、原发器官肿瘤转移及其他原因引起死亡的时间。纳入本研究的变量包括患者年龄、性别、吸烟情况、临床分期、分化程度、肿瘤直径、肿瘤位置及淋巴转移等情况。
1.3. 血浆miR-1290检测
所有的患者均于术前抽取空腹静脉血3 mL置于乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA）抗凝管中，离心分离血浆，−80 °C低温冰箱保存待测。以U6为实验内参在ABI 7500型荧光定量聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）仪（ABI公司，美国）上进行实时荧光定量PCR。反应体系为20 µL：1 µL引物及探针Mix（20×），10 µL TaqMan通用混合物溶液（2×），1.33 µL反转录产物cDNA，7.67 µL无核酸酶的水。扩增条件为：95 °C 10 min 1个循环，95 °C 15 s、60 °C 60 s进行45个循环，实验重复3次。每个反应体系中荧光信号达到所设定阈值所经历的循环数即为Ct值，采用2−ΔΔCt法计算miR-1290的表达水平，其中ΔCt=Ct目的基因−CtU6。
1.4. 统计学方法
采用SPSS 20.0统计软件对数据进行分析，所有连续变量均通过正态性检验和方差齐性检验，符合正态分布的计量资料以均数±标准差表示，组间比较采用独立样本t检验。计数资料组间比较采用χ2检验。单因素生存分析应用Kaplan-Meier法，组间比较行Log-rank检验，多因素生存分析应用COX回归分析。P<0.05为差异有统计学意义。
2. 结果
2.1. OSCC组和对照组血浆miR-1290表达水平比较
OSCC组血浆miR-1290表达水平（0.65±0.14）明显低于对照组（2.06±0.90），二者间差异有统计学意义（t=13.912，P<0.001）。
2.2. 血浆miR-1290用于诊断OSCC的最佳界值
血浆miR-1290用于诊断OSCC的最佳界值为1.14，曲线下面积（area under curve，AUC）为0.895（95%CI：0.837~0.958），其敏感度和特异度为89.2%和85.0%。
2.3. 血浆miR-1290表达水平与OSCC患者的临床病理特征比较
以miR-1290=1.14为界值，将70例OSCC患者分为高miR-1290组（miR-1290≥1.14，n=31）和低miR-1290组（miR-1290<1.14，n=39）。高miR-1290组与低miR-1290组临床分期、分化程度、肿瘤直径及淋巴结转移相比较，差异有统计学意义（P<0.05）。2组的性别、年龄、吸烟、饮酒情况及肿瘤位置相比较，差异无统计学意义（P>0.05）（表1）。
表 1. 血浆miR-1290表达水平与OSCC患者的临床病理特征比较.
Tab 1 Comparison of the expression level of plasma miR-1290 with the clinicopathological characteristics of OSCC patients
| 临床病理特征 | n | 高miR-1290组/% | 低miR-1290组/% | χ2值 | P值 | |
| 性别 | 男 | 46 | 20/64.5 | 26/66.7 | 0.035 | 0.851 |
| 女 | 24 | 11/35.5 | 13/33.3 | |||
| 年龄/岁 | <60 | 42 | 19/61.3 | 23/59.0 | 0.039 | 0.844 |
| ≥60 | 28 | 12/38.7 | 16/41.0 | |||
| 吸烟 | 有 | 49 | 21/67.7 | 28/71.8 | 0.135 | 0.713 |
| 无 | 21 | 10/32.3 | 11/28.2 | |||
| 饮酒 | 有 | 55 | 25/80.6 | 30/76.9 | 0.142 | 0.706 |
| 无 | 15 | 6/19.4 | 9/23.1 | |||
| 临床分期 | Ⅰ~Ⅱ | 44 | 25/80.6 | 19/48.7 | 7.541 | 0.006 |
| Ⅲ~Ⅳ | 26 | 6/19.4 | 20/51.3 | |||
| 分化程度 | 中高分化 | 60 | 30/96.8 | 30/76.9 | 5.558 | 0.018 |
| 低分化 | 10 | 1/3.2 | 9/23.1 | |||
| 肿瘤位置 | 舌癌 | 47 | 22/71.0 | 25/64.1 | 0.369 | 0.544 |
| 牙龈癌和颊黏膜癌 | 23 | 9/29.0 | 14/35.9 | |||
| 肿瘤直径/cm | <3 | 25 | 16/51.6 | 9/23.1 | 6.126 | 0.013 |
| ≥3 | 45 | 15/48.4 | 30/76.9 | |||
| 淋巴结转移 | 有 | 30 | 6/19.4 | 24/61.5 | 12.550 | <0.001 |
| 无 | 40 | 25/80.6 | 15/38.5 | |||
2.4. 血浆miR-1290表达水平与OSCC患者预后不良的关系
70例OSCC患者中有2例失访，随访率为97.1%（68/70），随访时间9~65个月，中位随访时间29.50个月。生存分析显示，低miR-1290组患者（42.8%）的总生存率明显低于高miR-1290组（63.5%），差异有统计学意义（Log-rank χ2=9.715，P<0.01）（图1）。低miR-1290组患者（24.6%）无进展生存率明显低于高miR-1290组（53.7%），差异有统计学意义（Log-rank χ2=12.805，P<0.01）（图2）。将单因素分析中有统计学意义的因素调入COX回归分析模型，结果显示临床分期、淋巴结转移及血浆miR-1290<1.14是影响OSCC患者预后不良的独立危险因素[危险度（hazard，HR）（95%CI）=2.402（1.806~4.520）、2.627（1.984~5.940）、2.738（2.152~6.117）]（表2）。
图 1. 高miR-1290组与低miR-1290组OSCC患者总生存率比较.
Fig 1 Comparison of overall survival rate of OSCC patients in high and low miR-1290 groups
图 2. 高miR-1290组与低miR-1290组OSCC患者无进展生存率比较.
Fig 2 Comparison of progression-free survival rate of OSCC patients in high and low miR-1290 groups
表 2. 影响OSCC患者预后不良的单因素及多因素COX回归分析.
Tab 2 Univariate and multivariate COX regression analysis of poor prognosis in OSCC patients
| 因素 | 单因素 |
多因素 |
||||
| HR值 | 95%CI | P值 | HR值 | 95%CI | P值 | |
| 临床分期 | 2.904 | 1.983~5.327 | 0.008 | 2.402 | 1.806~4.520 | 0.015 |
| 分化程度 | 2.317 | 1.562~3.683 | 0.031 | 1.484 | 0.913~1.865 | 0.092 |
| 肿瘤直径 | 1.726 | 1.184~2.520 | 0.045 | 1.172 | 0.894~1.793 | 0.186 |
| 淋巴结转移 | 3.753 | 2.648~7.985 | <0.001 | 2.627 | 1.984~5.940 | 0.004 |
| miR-1290<1.14 | 3.964 | 2.985~8.273 | <0.001 | 2.738 | 2.152~6.117 | <0.001 |
3. 讨论
miRNA是一种内源性非编码蛋白质的小分子RNA，与靶mRNA分子结合后可以使mRNA降解并抑制蛋白质翻译，进而调控靶基因的表达，在细胞增殖、凋亡、侵袭和转移等生物学行为中起重要作用[4]。有研究[5]–[6]表明，miRNA在OSCC组织和血液中存在异常表达，不同种类的miRNA通过不同调控机制来发挥功能，在口腔癌的进展过程中miRNA的表达水平随之变化，有望作为OSCC诊断和预后的重要生物学评价指标。
Schneider等[7]研究认为，多种miRNA在OSCC中异常表达，其通过抑制凋亡，促进细胞增殖、肿瘤的非依赖性生长、迁移及侵袭等，对OSCC的恶性生物学行为发挥重要的调控作用。miR-1290调控癌基因作用包括两方面：当激活癌基因时，可引起癌基因蛋白质产物的过量表达，促进癌变过程；当抑制癌基因时，可促进肿瘤细胞的凋亡，从而达到抑制肿瘤的目的，其异常表达参与了信号激活、细胞增殖和分化、血管形成和侵袭转移等生物学过程，可以作为肝癌和食管鳞癌诊断及预后预测的生物标志物[8]–[9]。因此，研究miR-1290在OSCC患者中的表达情况，对OSCC预后判断及靶向治疗具有重要的意义。
本研究显示，OSCC组血浆miR-1290表达明显低于对照组，提示miR-1290可能具有抑癌基因的作用，其表达下调可能参与OSCC的发生发展。本研究随着临床分期增加、分化程度越来越差及有淋巴结转移的OSCC患者，血浆miR-1290表达水平均明显降低，说明miR-1290低表达与OSCC患者较差的临床病理特征有关，miR-1290在OSCC中发挥抑癌基因功能，其低表达可导致一系列靶向的癌基因过度激活，从而参与OSCC的发生发展。Chen等[10]研究显示，与正常对照组相比，OSCC患者血清miR-99a表达明显降低，低miR-99a表达的OSCC患者更常出现分化不良和临床晚期，其总体生存期较短，可能是预测OSCC患者预后的一个有价值的标志物。Sun等[11]研究发现，OSCC患者血清miR-9表达水平明显下降，且与多种临床病理参数如临床分期及淋巴结转移显著相关，可作为预测OSCC患者病情进展和预后的独立因素。本研究进一步探讨miR-1290对OSCC患者预后的临床价值，并分析OSCC患者miR-1290表达水平与生存时间之间的关系，结果显示低miR-1290组患者总生存率和无进展生存率明显低于高miR-1290组，说明miR-1290低表达与OSCC患者生存期短有关。本研究多因素COX回归模型分析显示，临床分期、淋巴结转移及血浆miR-1290<1.14是影响OSCC患者预后不良的独立危险因素，其中miR-1290<1.14的HR（2.738，95%CI：2.152~6.117）最大，提示miR-1290<1.14预测OSCC患者预后不良具有较高的价值。Shi等[12]通过多变量分析发现，miRNA是预测OSCC患者生存的独立因素，与传统的临床病理因素如病理分级及淋巴结转移（TNM）分期相比，具有更高的预测价值，并可能作为一个有前途的预后预测因子。另有研究[13]表明，血浆miRNA表达下调与OSCC患者的临床特征及与术后复发显著相关，有望作为预测OSCC患者预后不良的生物标志物。
综上所述，OSCC患者血浆miR-1290表达水平明显降低，临床分期、淋巴结转移及血浆miR-1290<1.14是影响OSCC患者预后不良的独立危险因素，miR-1290可能是预测OSCC预后不良的潜在标志物。但这些研究仍处于初步探索阶段，未来仍需更多的多中心、大样本的临床研究来进一步探讨。
Footnotes
利益冲突声明：作者声明本文无利益冲突。
References
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