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. 2020 Nov 20;40(11):1593–1600. [Article in Chinese] doi: 10.12122/j.issn.1673-4254.2020.11.09

乳腺浸润性导管癌中JMJD3、MMP-2和VEGF的表达及其与临床病理特征的关系

Association of JMJD3, MMP-2 and VEGF expressions with clinicopathological features of invasive ductal breast carcinoma

徐 小艳 1, 王 建君 1, 闫 琛 1, 门 颖丽 2, 姜 黄 1, 方 会娟 1, 徐 宪伟 1, 杨 金花 1,*
PMCID: PMC7704386  PMID: 33243732

Abstract

目的

观察乳腺浸润性导管癌中JMJD3、MMP-2和VEGF蛋白水平的表达，研究过表达JMJD3对乳腺癌细胞增殖以及MMP-2和VEGF表达的影响。

方法

用免疫组织化法和RT-PCR检测乳腺浸润性导管癌及相对应的癌旁组织中JMJD3、MMP-2和VEGF蛋白和mRNA的表达情况，分析蛋白表达与乳腺癌患者临床病理特征的关系及上述蛋白的相关性，采用Kaplan-Meier法来评估JMJD3、MMP-2和VEGF蛋白的异常表达与乳腺癌患者生存期之间的关系。通过重组质粒在乳腺癌MDA-MB-231细胞中过表达JMJD3，用CCK-8和免疫组化检测Ki67表达分析其对增殖的影响，用RT-PCR方法检测MMP-2和VEGFmRNA水平表达的变化。

结果

免疫组化结果显示，乳腺癌组织中JMJD3阳性强度低于相应癌旁组织（P < 0.05），乳腺癌组织中MMP-2和VEGF阳性强度高于相应癌旁组织（P < 0.05）；RT-PCR结果显示，乳腺癌JMJD3 mRNA水平低于癌旁组织，MMP-2和VEGF mRNA水平高于癌旁组织（P < 0.05）。JMJD3的表达在乳腺癌直径较小、高分化、TNMⅠ+Ⅱ期、淋巴结无转移及分子分型Luminal A型和Luminal B型表达率较高（P < 0.05），MMP-2和VEGF的表达在乳腺癌肿瘤直径较大、低分化、TNM Ⅲ+Ⅳ期、淋巴结有转移、Luminal B型和Her-2过表达型表达率较高（P < 0.05）。Kaplan-Meier分析结果显示，JMJD3蛋白表达水平较高者的无病生存期高于低表达者（P < 0.05），MMP-2和VEGF蛋白表达水平较高者的无病生存期低于低表达表达者（P < 0.05）。Cox回归模型分析显示，JMJD3、MMP-2和VEGF、分化程度是乳腺癌预后的独立危险因素。Spearman相关分析结果显示，JMJD3与MMP2和VEGF均呈负相关（r=-0.569，-0.533，P < 0.05），MMP2和VEGF呈正相关（r=0.923，P < 0.05）。过表达JMJD3能够抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、MMP-2和VEGF的表达。

结论

JMJD3、MMP-2和VEGF在乳腺浸润性导管癌中的异常表达与肿瘤的增殖、浸润、转移及预后密切相关，三者可作为判断乳腺癌预后不良的重要指标之一。

Keywords: 乳腺浸润性导管癌, JMJD3, MMP-2, VEGF, 临床病理特征

肿瘤的侵袭和转移是乳腺癌患者死亡的主要原因，恶性肿瘤的侵袭和转移是一个多分子异常、多步骤进展的复杂过程，涉及众多癌基因激活、抑癌基因失活和相关信号通路的异常[1]。因此寻找抑制乳腺癌侵袭和转移相关基因靶点成为当前临床关注及研究的热点。JMJD3编码基因位于人类第17号染色体上，其异常表达与肿瘤的发生发展有密切关系，被认为是一种具有潜在应用价值的肿瘤评估指标[2-4]。目前国内外对JMJD3在肿瘤中的表达情况报道不一，其是促癌基因还是抑癌基因研究报道尚不一致。JMJD3在乳腺癌组织中的表达状况尚未见国内外同类研究。基质金属蛋白酶（MMP）是与侵袭和转移相关的蛋白，正常机体中的表达较少，在肿瘤性病变进展时分泌和合成增多，其主要功能是对细胞外基质和基底膜进行降解从而促进肿瘤的侵袭和转移。MMP在降解肿瘤基底膜和肿瘤间质的过程中能够诱导血管内皮细胞生长因子（VEGF）产生，MMP-2和VEGF在恶性肿瘤的侵袭和转移中扮演重要角色[5-7]。

JMJD3在乳腺癌中的表达能否反映浸润转移及预后情况，是否与MMP-2和VEGF具有相关性？为回答上述问题，本研究对乳腺浸润性导管癌中JMJD3、MMP-2和VEGF的表达情况进行了免疫组织化学检测和RT-PCR检测，分析上述指标的相关性及与乳腺浸润性导管癌临床病理参数的关系，并观察过表达JMJD3对乳腺癌细胞生长的生物学效应的影响，以期拓展人们对乳腺癌发病机制的理解和认识，为乳腺癌的治疗和预防提供新策略。

1. 资料和方法

1.1. 病例资料

收集郑州人民医院2013年6月~2014年6月105例乳腺原发浸润性导管癌及相对应的癌旁病理活检标本。按照2012年WHO乳腺癌组织病理分级分类法，对其进行分组。根据12届St.Gallen专家共识的乳腺癌分子分型标准，在105例乳腺癌患者中，Luminal A型占44例，Luminal B型占36例，人类表皮生长因子受体-2（Her-2）过表达型占15例，基底样型占10例。有完整的5年随访资料的病人83例，患者生存期从手术之日开始计算，终止日期为肿瘤复发日期或末次随访日。所有标本均经10%的甲醛固定，石蜡包埋，并经郑州人民医院病理科诊断确诊。其中20例新鲜乳腺癌组织即时液氮冻存，供后续RT-PCR使用。纳入标准：女性；术前均未接受化疗、放疗或中医治疗；经过乳腺保乳或者乳腺根治性切除术，术后病理证实为乳腺浸润性导管癌；有完整随访资料患者的肿瘤复发均为乳腺浸润性导管癌所致。病例均满足上述标准，如不满足则剔除。

1.2. 主要试剂

JMJD3一抗兔抗人多克隆抗体（Abcam），MMP-2和VEGF一抗兔抗人单克隆抗体（即用型）、二抗及二氨基联苯胺(DAB)（福州迈新公司）；JMJD3真核过表达载体（上海吉凯生物科技有限公司）；CCK-8试剂盒（上海尚宝生物科技有限公司）。总RNA提取试剂盒、逆转录、qRT-PCR检测试剂盒（Invitrogen）。引物由ABI公司的Primer Express Software v2.0设计，由华大基因公司合成。

1.3. 免疫组织化学染色

石蜡组织切片、烤片、脱蜡并水化；EDTA抗原修复；兔抗人单克隆抗体一抗37 ℃孵育2 h；二抗37 ℃孵育20~30 min；DAB显色5~10 min；脱水、透明和封片。用已知JMJD3、MMP-2和VEGF阳性的乳腺癌组织和PBS分别代替一抗作为阳性和空白对照。

1.4. 免疫组化结果判断

JMJD3、Ki67阳性信号呈棕褐色，表达于细胞核；MMP-2和VEGF阳性信号为棕黄色，表达于细胞质。JMJD3、MMP-2和VEGF与临床病理特征的关系采用定量分析。用ImagePro Plus（IPP）图像分析软件，测试其阳性单位（PU）值[8]，具体方法如下：用IPP图像分析软件在40倍物镜下，从每例切片中取10个着色最强的视野输入计算机，把其转换成灰色照片。对于正常乳腺组织，每个视野测试20个正常乳腺上皮细胞（数目不足者，测完整张切片为止）；对于乳腺导管癌组织，每个视野测试20个阳性癌细胞。用交互式测试法测试每个阳性细胞的灰度Gα，同时在相应的10个视野中测试背景灰度Gβ并取其平均值，每例样本共测试200个阳性细胞。本研究中测试软件设定的Gmax为256，按下列公式计算每个阳性细胞的PU值：

PU=|Gα－Gβ|/ Gmax×100

JMJD3、MMP-2和VEGF与预后的关系采用半定量判定[9]。根据染色强度和染色细胞所占百分比进行半定量判定，其中染色强度分为：阴性（-），弱阳（+），中阳（++），强阳（+++）4个等级。染色百分比分为 < 30%、30%~50%、≥50%。低表达包括阴性（-）、弱阳性（+，无论细胞着色范围）、中阳（++，细胞着色范围 < 30%）；高表达包括：中阳（++，细胞着色范围≥30%）、强阳（+++，无论细胞着色范围）。本研究中免疫组化的判读有两位高年资病理医师采用双盲法进行判读。

1.5. RT-PCR检测及结果判定

RNA抽提与质检；逆转录；荧光定量PCR扩增；数据输出分析。实时荧光定量PCR反应体系由16 μL的反应体系组成，反应在ABI ViiA 7 PCR仪上对384孔板中进行每个样品做3次平行实验。反应中的Ct值数据的采集采用校正的阈值设定，实时荧光定量PCR的方法mRNA以GAPDH作为内参基因，采用2-ΔΔct法进行相对定量。GAPDH正向引物为5'-AGCCACATCGCTC AGACAC-3'，反向引物5'-GCCCAATACGACCAAAT CC-3'；JMJD3正向引物为5'-GGCCCTCGACTCTTT GATTT-3'，反向引物为5'-GGATTCGTCCAGCATCT TCA-3'；MMP-2正向引物为5'-CGGCGGTCACAGCT ACTTCT-3'，反向引物为5'-ACAGTTTGTTCCTCGT GGCG-3'；VEGF正向引物为5'-GGCCTCCGAAACC ATGAACT-3'，反向引物为5'-TCGTGATGATTCTGC CCTCCG-3'。

1.6. CCK-8法检测JMJD3对增殖的影响

细胞转染与培养：转染前1 d，以3.0×105~8.0×105接种乳腺癌MDA-MB-231细胞于6孔板，常规培养细胞，24 h内细胞汇合度达到70%~90%。铺板后20 h，细胞生长状态良好，进行转染，分为对照组和实验组两组。对照组每孔加入2500 ng阴性对照质粒及5 μL转染试剂；实验组每孔加入2500 ng JMJD3质粒及5 μL转染试剂。添加DMEM培养液至终体积2 mL每孔。6 h更换正常培养基继续培养。CCK-8法检测：分别收集转染0、24、48及72 h后乳腺癌细胞，在96孔板内以5000个/（100 μL·孔）接种。过夜培养后每孔加入10 μLCCK-8溶液避光培养2 h，吸上清，酶标仪读取450 nm波长下样本的A450nm值。

1.7. 统计学处理

采用SPSS17.0统计软件进行数据处理与统计分析，计量资料以均数±标准差来表示，采用方差分析对多样本均数之间进行比较。若方差不齐，组间多重比较采用Dunnett'S T3检验；若方差齐，组间多重比较采用最小显著性差异法（LSD）。两样本均数间比较采用独立样本t检验。双变量相关分析采用Spearman相关分析；生存分析采用Kaplan-Meier法，并以Log-rank法检验；采用Cox比例风险回归模型进行多因素生存分析。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2. 结果

2.1. 乳腺浸润性导管癌中JMJD3、MMP-2和VEGF的表达

免疫组化结果显示，JMJD3主要定位于细胞核，在乳腺浸润导管癌及癌旁组织中呈棕褐色，105例乳腺浸润性导管癌JMJD3的阳性强度低于癌旁组织，差异有统计学意义（P=0.01）。MMP-2和VEGF在乳腺浸润性导管癌及癌旁组织中主要定位于细胞质，为粗细相对均匀的棕褐色颗粒，105例乳腺浸润性导管癌中MMP-2和VEGF阳性强度高于癌旁组织（P=0.01，图 1，表 1）。

1.

1

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JMJD3、MMP-2和VEGF蛋白在乳腺癌旁组织及浸润性导管癌中的表达

Expression of JMJD3, MMP-2 and VEGF in breast cancer tissues and adjacent tissues (Immunohistochemical staining, Original magnification: ×200). A: JMJD3 in adjacent tissue; B: MMP-2 in adjacent tissue; C: VEGF in adjacent tissue; D: JMJD3 in breast cancer tissue; E: MMP-2 in breast cancer tissue; F: VEGF in breast cancer tissue.

1.

乳腺癌和癌旁组织中JMJD3、MMP-2和VEGF表达

Expression of JMJD3, MMP-2, and VEGF in breast cancer tissues and adjacent tissues (n=105, Mean±SD)

Groups JMJD3 MMP-2 VEGF
Breast cancer tissues 13.64±5.29 13.95±5.31 14.08±5.20
Adjacent tissues 19.834±5.71 7.19±3.61 7.21±3.62
P 0.000 0.000 0.000
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RT-PCR检测结果显示，JMJD3 mRNA在乳腺浸润性导管癌组织相对表达量低于乳腺癌旁组织中（P=0.01）；MMP-2、VEGF mRNA在乳腺浸润性导管癌组织相对表达量高于乳腺癌旁组织（P=0.01，图 2）。

2.

2

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RT-PCR法检测JMJD3、MMP-2和VEGF mRNA在乳腺癌旁组织及浸润性导管癌中的表达

RT-PCR detection of JMJD3, MMP-2 and VEGF mRNA expression in breast cancer tissues and adjacent tissues. *P=0.01

2.2. JMJD3、MMP-2和VEGF与乳腺浸润性导管癌临床病理特征的关系

105例乳腺浸润性导管癌中，JMJD3与肿物直径大小、组织学分化程度、淋巴结转移、pTNM分期及分子亚型有关（P < 0.05），直径越大，分化越差、淋巴结有转移、分期越高，JMJD3蛋白表达水平越低，在Luminal A型和Luminal B型均高于Her-2过表达型和基底样型。105例乳腺浸润性导管癌中，MMP-2和VEGF与肿物直径大小、组织学分化程度、淋巴结转移、pTNM分期有关和分子亚型有关（P < 0.05），直径越大，分化越差、淋巴结有转移、分期越高，MMP-2和VEGF蛋白表达水平越高，在Luminal B型和Her-2过表达型中均高于Luminal A型和基底样型（表 2）。

2.

乳腺浸润性导管癌组织JMJD3、MMP-2和VEGF表达与临床病理特征的关系

Association of JMJD3, MMP-2, and VEGF expression with clinicopathological characteristics of breast cancer (Mean±SD)

Characteristics n JMJD3 MMP-2 VEGF
PU P PU P PU P
a1, a2, a3, b1, b2, b3, c1, c2, c3, c4P < 0.05 vs the corresponding group, respectively.
Age (year)
  ≥50 50 14.52±5.20 0.225 14.10±4.78 0.779 14.04±4.70 0.933
   < 50 55 12.54±5.17 13.81±5.80 14.12±5.66
Position
  Left 49 13.95±4.89 0.579 13.33±5.25 0.268 13.58±5.44 0.363
  Right 56 13.37±5.64 14.49±5.36 14.52±5.00
Maximal tumor diameter(cm)
  ≤2 35 17.15±4.64a2, a3 0.000 12.71±5.56a3 0.005 13.34±6.00a3 0.013
   > 2, ≤5 40 13.30±3.52a1, a3 13.07±4.48a3 12.98±4.04a3
   > 5 30 10.01±5.44a1, a2 16.57±5.29a1, a2 16.41±5.00a1, a2
Histologic differentiation
  Well differentiation 38 16.93±4.54b2, b3 0.000 12.80±5.45b3 0.006 13.38±5.85b3 0.016
  Moderate differentiation 39 13.18±3.66b1, b3 13.15±4.51b3 13.05±4.06b3
  Poor differentiation 28 9.82±5.45b1, b2 16.63±5.41b1, b2 16.46±5.12b1, b2
Lymph node metastasis
  Without 57 16.43±3.90 0.000 13.12±5.16 0.010 12.72±4.97 0.038
  With 48 10.33±4.81 15.22±5.07 15.41±5.39
TNM stage
  Ⅰ+Ⅱ 54 14.93±4.27 0.010 11.52±4.38 0.000 11.88±4.57 0.000
  Ⅲ+Ⅳ 51 12.28±5.93 16.52±5.03 16.41±4.84
Molecular subtypes
  Luminal A 44 16.64±5.17c3, c4 0.000 11.63±4.92c2, c3 0.000 12.07±5.25c2, c3 0.002
  Luminal B 36 14.14±3.94c3, c4 16.13±5.2c1, c4 16.12±4.88c1, c4
  Her-2 overexpression 15 8.17±3.28c1, c2 16.01±4.53c1, c4 15.73±4.62c1, c4
  Basal like pattern 10 9.35±3.09c1, c2 12.63±4.66c2, c3 12.69±4.12c2, c3
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2.3. 乳腺浸润性导管癌中JMJD3、MMP-2和VEGF相关性分析

Spearman相关分析显示，JMJD3和MMP-2表达呈负相关，差异有统计学意义（r=-0.569，P=0.01）。JMJD3和VEGF表达呈负相关，差异有统计学意义（r=-0.533，P=0.01）。MMP2和VEGF表达呈正相关，差异有统计学意义（r=0.923，P=0.01）。

2.4. JMJD3、MMP-2和VEGF蛋白的表达与乳腺癌患者生存期之间的关系

83例乳腺浸润性导管癌患者5年无病生存率为59.04%（49/83）。JMJD3蛋白高表达者的无病生存率77.27%（34/44）高于低表达者38.45%（15/39），经Logrank时序检验，两组差异有统计学意义（χ2=16.425，P=0.01）。MMP-2和VEGF蛋白高表达者无病生存率50.94%（27/53）、42.59%（23/54）均明显低于低表达者73.33%（22/30）、89.66%（26/29），经Log-rank时序检验，两组差异均有统计学意义（χ2=5.796，P=0.01；χ2=18.201，P=0.01，图 3）。Cox回归模型分析显示，JMJD3、MMP-2和VEGF、分化程度是乳腺癌预后的独立危险因素（表 3）。

3.

3

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JMJD3、MMP-2和VEGF的表达与乳腺癌患者无病生存时间的关系

Correlation of JMJD3 (A), MMP-2 (B) and VEGF (C) expression with disease-free survival time of breast cancer patients.

3.

乳腺癌患者预后多因素生存分析

Multivariate survival analysis of breast cancer patients (n=83)

Group B SE Wald Sig. Exp (B) 95.0%CI for Exp (B)
JMJD3 2.500 1.054 5.629 0.018 12.180 1.544-96.049
MMP2 -3.053 1.095 7.767 0.005 0.047 0.006-0.404
VEGF 3.290 0.890 13.651 0.000 26.838 4.686-153.701
Age 0.878 0.543 2.612 0.106 2.407 0.830-6.983
Position 0.112 0.434 0.067 0.796 1.119 0.478-2.618
Tumor Maximal diameter -0.108 0.290 0.140 0.708 0.897 0.508-1.584
Histologic differentiation 1.088 0.267 16.595 0.000 2.968 1.759-5.010
Lymph node metastasis -0.343 0.416 0.680 0.410 0.710 0.314-1.604
TNM stage 0.715 0.403 3.144 0.076 2.043 0.927-4.503
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2.5. 过表达JMJD3抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、MMP-2及VEGF的表达

在转染对照组和实验组细胞后，RT-PCR检测JMJD3 mRNA水平在实验组高于对照组（图 4A），CCK-8法检测对照组和实验组结果显示JMJD3组细胞增殖能力在24、48、72 h较对照组分别下降了42.17%，46.98%，53.61%，差异均具有统计学意义（P=0.01，图 4B，表 4）。用免疫组化对照组和实验组细胞进行Ki67蛋白染色，计数200个细胞，用图像分析对ki67蛋白进行定量测试，结果显示Ki67蛋白PU值在JMJD3组低于对照组（6.47±0.87 vs 22.77±1.65，P=0.01，图 4C、D）。RT-PCR结果显示MMP-2和VEGFmRNA水平在过表达JMJD3组中低于对照组，差异具有统计学意义（P=0.01）。

4.

4

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JMJD3过表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、MMP-2及VEGF的表达影响

Effect of JMJD3 overexpression on proliferation and MMP-2 and VEGF expressions of breast cancer cells. A: Expression of JMJD3 mRNA in the cells detected by RT-PCR after transfection; B: Proliferation activity of MDA-MB-231 cells with JMJD3 overexpression and the control cells detected by CCK-8 assay; C, D: Expression of Ki-67 in control MDA-MB-231 cells and the cells with JMJD3 overexpression detected by immunohistochemistry, respectively (×400); E: RT-PCR for detecting MMP-2 mRNA in MDA-MB-231 cells with JMJD3 overexpression and the control cells; F: RT-PCR for detecting VEGF mRNA in MDA-MB-231 cells with JMJD3 overexpression and the control cells.*P < 0.05 vs control group.

4.

转染JMJD3后各时间点CCK-8法检测乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖活性

Proliferation of MDA-MB-231 cells with JMJD3 overexpression at different time points following transfection (Mean±SD, 490 nm)

Group Time
0 h 24 h 48 h 72 h
*P=0.000 vs control group.
Control group 0.86±0.02 1.66±0.02 2.15±0.01 2.63±0.06
JMJD3 overexpression 0.86±0.08* 0.96±007* 1.14±0.05* 1.22±0.02*
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3. 讨论

研究发现，JMJD3作为一种Lys27位点三甲基化组蛋白H3去甲基化酶（H3K27me3），其异常表达与多种肿瘤的发生、发展密切相关[10-11]，有关JMJD3在肿瘤发生发展过程中扮演促癌基因或者抑癌基因角色，观点不一。有研究认为JMJD3表达降低可能促进肺癌的发生发展[12]。有研究发现胶质瘤细胞JMJD3较瘤旁组织表达降低[13]。上述研究均表明JMJD3在肿瘤中扮演抑癌基因角色。但是，有研究发现胶质瘤JMJD3表达高于瘤旁组织，JMJD3过表达可增强肿瘤的迁移能力，该机制通过影响SNAI1基因调控区H3K27me3水平而调节胶质瘤侵袭过程[14]。有关JMJD3在乳腺浸润性导管癌组织中表达规律的研究，国内尚未见相关文献报道，国外甚少报道。本研究结果显示，JMJD3蛋白和mRNA在乳腺浸润性导管癌组织表达水平较癌旁组织低，JMJD3蛋白在组织学分化差、淋巴结转移及较高TNM分期中表达率减低，这提示JMJD3在乳腺癌的浸润转移中扮演了抑癌基因的角色，因此我们推测JMJD3在不同的肿瘤组织中可能扮演不同的角色。本研究显示，JMJD3与肿瘤直径相关，其表达越低，肿瘤直径越大。肿瘤直径的大小反应细胞增殖能力，本研究采用CCK-8法和免疫组织化学检测Ki67发现JMJD3过表达乳腺癌细胞增殖能力显著低于对照组，表明JMJD3对乳腺癌细胞的增殖具有抑制作用，这与其国内研究报道观点一致。国内有研究发现胃癌中JMJD3低表达对胃癌细胞的增殖具有抑制作用，对细胞凋亡具有促进作用[15]。有学者研究下调JMJD3后人脐静脉内皮细胞的增殖能力增强，细胞凋亡减少，细胞侵袭、迁移能力增强[16]。

乳腺癌分子分型和预后及治疗密切相关，本研究结果显示，JMJD3与乳腺癌分子亚型有关，即其表达水平在Luminal A型和Luminal B型显著高于Her-2过表达型和基底样型乳腺癌。生存分析结果显示JMJD3蛋白高表达者的生存期低于低表达者，JMJD3在乳腺癌中与预后的关系与其在结肠癌中的研究较一致，有研究对151例结肠癌患者术后生存分析表明JMJD3在结肠癌组织中低表达术后生存期普遍较短[5]，且回归分析表明JMJD3的低表达是患者不良预后的危险因子之一。这表明免疫组织化学检查JMJD3有助于乳腺癌的预后和判断。

MMP2能够降解细胞外基质，而促进肿瘤的浸润和转移，较多文献研究表明，乳腺癌高表达MMP2与浸润转移密切相关[17]。VEGF是肿瘤血管生成过程中作用最强、特异性最高的促血管生长因子，其表达上调能够促进乳腺癌细胞的增殖、转移和复发[18]。本文采用免疫组织化学和RT-PCR检测方法结果显示，MMP-2和VEGF在乳腺癌旁组织几乎不表达或低表达，而在乳腺癌组织中高表达，表明其对乳腺癌的病理诊断有一定的参考价值。通过分析MMP-2和VEGF蛋白表达与乳腺癌临床病理参数的关系，结果显示肿瘤直径较大、有淋巴结转移、组织学低分化及pTNM分期越高，MMP-2和VEGF的表达增加，生存分析结果表明MMP-2和VEGF蛋白高表达者的生存期明显低于低表达者，这提示MMP-2和VEGF的高表达与乳腺癌浸润转移和预后密切相关。本研究结果还发现MMP-2和VEGF在Her-2过表达型和Luminal B型表达显著高于Luminal A型和三阴性型，其具体机制仍有待进一步研究。较多研究认为MMP-2和VEGF在乳腺癌[19]、胃癌[20-21]、非小细胞肺癌等[22]的浸润转移密切相关，其高表达能够反应肿瘤的不良预后。本研究MMP-2和VEGF在乳腺癌中的表达情况与以往大多数文献报道基本相同。但有研究通过原位杂交方法检测63例乳腺浸润性导管癌MMP-2表达情况[23]，结果显示MMP-2与肿瘤的大小、组织学分级及细胞核的级别无明显相关性，推测主要原因如下：检测方法不同；样本纳入的标准不同，该篇文献浸润性导管癌均为直径小于5 cm且临床分期为T1、T2浸润性导管癌，而本研究对肿物直径及临床分期并没有限制。

目前国内外对JMJD3、MMP-2和VEGF在乳腺癌中单独研究较多见，乳腺癌中JMJD3与MMP-2和VEGF相关性研究未见同类报道。本研究结果表明JMJD3与MMP-2和VEGF均呈负相关性，过表达JMJD3能够抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的MMP-2和VEGF的表达。JMJD3过表达能够促进上皮间质转化途径促进肿瘤的浸润转移，其在胶质瘤细胞[24]、肝癌细胞[25-26]、肾癌细胞[27]和弥漫大B细胞淋巴瘤[28]已有研究报道。MMP-2和VEGF在上皮间质转化过程中扮演重要角色，较多研究表明MMP-2和VEGF在上皮间质转化过程中高表达，并且与肿瘤的侵袭和转移密切相关[29-32]，被认为是上皮间质转化过程中的标记物[32-33]。JMJD3、MMP-2和VEGF均在上皮间质转化过程中发挥重要作用，结合本文的研究结果JMJD3在乳腺浸润性导管癌中扮演抑癌基因角色，其表达与MMP-2和VEGF呈负相关，推测JMJD3可能通过抑制上皮间质转化过程下调MMP-2和VEGF的表达，乳腺癌中JMJD3在上皮间质转化过程中是否与其他肿瘤不同，以此切入点可以作为后续的研究。

综上所述，JMJD3在乳腺癌中表达下调，MMP-2和VEGF在乳腺癌中表达上调，JMJD3和MMP-2及VEGF表达呈负相关，JMJD3、MMP-2和VEGF的异常表达与乳腺癌的浸润、转移及预后密切相关。联合检测JMJD3和MMP-2及VEGF的表达水平，可以更加准确、客观地评价乳腺癌患者的预后，对上述蛋白表达规律及相互作用的研究，将有可能在分子水平进一步揭示乳腺癌的发生机制，拓展人们对乳腺癌发病机制的理解和认识。

Biography

徐小艳，硕士，主治医师，E-mail: xxy123com@sina.com

Funding Statement

河南省普通科技攻关计划（182102311189）

Contributor Information

徐 小艳 (Xiaoyan XU), Email: xxy123com@sina.com.

杨 金花 (Jinhua YANG), Email: jinhuay65@sina.com.

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Articles from Journal of Southern Medical University are provided here courtesy of Editorial Department of Journal of Southern Medical University

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