Abstract
目的
了解广西地区儿童地中海贫血基因类型及其分布。
方法
2011年1月至2019年12月对广西壮族自治区妇幼保健院30 417例地中海贫血筛查阳性患儿采用单管多重PCR后经琼脂糖凝胶电泳和反向点杂交技术进行常见α、β地中海贫血基因检测。对2 703例疑似罕见地中海贫血患儿进行跨越断裂点PCR检测和/或基因序列分析。
结果
30 417例地中海贫血筛查阳性患儿中，确诊地中海贫血23 214例（76.32%），其中α、β及α合并β地中海贫血检出率分别为47.77%、23.75%和4.80%。检出13种α地中海贫血等位基因共计18 480个，以--SEA为主（54.98%），包括7种罕见等位基因：--THAI（0.43%）、HKαα（0.02%）、-α30（0.01%）、-α1.0（0.01%）、-α2.4（0.01%）、-α21.9（0.01%）和HBA2:C272-279 del（0.01%）；检出17种β地中海贫血等位基因共计9 168个，主要为CD41-42（47.79%），其次是CD17（25.53%），包括3种罕见等位基因：IVS-Ⅱ-5（0.02%）、IVS-I-2（0.01%）和Gγ(Aγδβ)0（0.01%）。14 531例α地中海贫血患儿中检出37种基因类型，6种主要类型为--SEA/αα（52.20%）、-α3.7/αα（13.24%）、αCSα/αα（7.52%）、-α4.2/αα（6.06%）、--SEA/-α3.7（5.91%）和αWSα/αα（3.41%），共占88.34%。7 223例β地中海贫血患儿中检出49种基因类型，6种主要类型为CD41-42/βN（45.81%）、CD17/βN（24.30%）、IVS-Ⅱ-654/βN（7.49%）、-28/βN（5.62%）、CD71-72/βN（4.42%）和CD26/βN（3.94%），共占91.13%。1 460例α合并β地中海贫血患儿中检出137种基因类型，主要为--SEA/αα合并CD41-42/βN（14.17%）、CD17/βN（8.35%）。HbH病（α0/α+）2 050例，包括合并β地中海贫血杂合子134例；巴氏水肿胎（--SEA/--SEA）12例；β地中海贫双重杂合子355例、纯合子128例，包括合并α地中海贫血93例。
结论
广西地区儿童地中海贫血基因突变多样，基因类型丰富；以α地中海贫血为主，--SEA/αα是主要基因类型；α合并β地中海贫血比例较高，β地中海贫血双重杂合子和纯合子（中重型）患儿出生较多。
Keywords: 地中海贫血, 基因型, 儿童
Abstract
Objective
To investigate the distribution of genotypes of thalassemia in children in Guangxi, China.
Methods
A total of 30 417 children with positive results of thalassemia screening in the Maternal and Child Health Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region from January 2011 to December 2019 were enrolled. Single-tube multiplex PCR, agarose gel electrophoresis, and reverse dot blot hybridization technique were used for the detection of common α- and β-thalassemia genes. Gap-PCR or gene sequence analysis was performed for 2 703 children suspected of rare thalassemia.
Results
Among the 30 417 children with positive results of thalassemia screening, 23 214 (76.32%) were diagnosed with thalassemia, and the detection rates of α-thalassemia, β-thalassemia, and α-thalassemia with β-thalassemia were 47.77%, 23.75%, and 4.80% respectively. A total of 13 types of α-thalassemia alleles (18 480 alleles in total) were detected, mainly --SEA (54.98%), including seven rare alleles, i.e., --THAI (0.43%), HKαα (0.02%), -α30 (0.01%), -α1.0 (0.01%), -α2.4 (0.01%), -α21.9 (0.01%), and HBA2:C272-279 del (0.01%). A total of 17 types of β-thalassemia alleles (9 168 alleles in total) were detected, mainly CD41-42 (47.79%), followed by CD17 (25.53%), including three rare alleles, i.e., IVS-II-5 (0.02%), IVS-I-2 (0.01%), and Gγ(Aγδβ)0 (0.01%). A total of 37 genotypes were detected in 14 531 children with α-thalassemia, among which the most common 6 genotypes were --SEA/αα (52.20%), -α3.7/αα (13.24%), αCSα/αα (7.52%), -α4.2 (6.06%), --SEA/-α3.7 (5.91%), and αWSα/αα (3.41%), accounting for 88.34%. A total of 49 genotypes were detected in 7 223 children with β-thalassemia, among which the most common 6 genotypes were CD41-42/βN (45.81%), CD17/βN (24.30%), IVS-II-654/βN (7.49%), -28/βN (5.62%), CD71-72/βN (4.42%), and CD26/βN (3.94%), accounting for 91.13%. A total of 137 genotypes were detected in 1 460 children with both α- and β-thalassemia, mainly --SEA/αα combined with CD41-42/βN (14.17%) and CD17/βN (8.35%). A total of 2 050 children were diagnosed with hemoglobin H disease (α0/α+), among whom 134 had β-thalassemia heterozygote and 12 had Bart hydrops fetalis syndrome (--SEA/--SEA); 355 children were diagnosed with β-thalassemia double heterozygote, and 128 were diagnosed with β-thalassemia homozygote, including 93 children with α-thalassemia.
Conclusions
There are diverse gene mutations and rich genotypes of thalassemia among children in Guangxi, and α-thalassemia is more common, with --SEA/αα as the major genotype. There is a high proportion of children with both α- and β-thalassemia, and there are relatively high incidence rates of β-thalassemia double heterozygote and homozygote (intermedia and major).
Keywords: Thalassemia, Genotype, Child
广西是我国地中海贫血的高发地区，人群中α、β及α合并β地中海贫血发生率分别为12.51%~15.35%、5.11%~6.64%和1.47%~2.08%［1-2］。重型α地中海贫血患儿多在出生后死亡，中重型β地中海贫血患儿表现为中、重度贫血，由于缺乏有效的治疗措施，绝大多数患儿依靠输血维持生命，这给该类患儿家庭带来沉重的负担［3］。2010年以来，广西政府加强了对地中海贫血的防控，建立并逐步完善了三级防控体系，加大了资金投入，增加了人员培训，在一、二级预防方面取得了丰硕的成果，极大地减少了重度地中海贫血患儿的出生［4］。然而在三级预防方面的投入及报道相对较少，报道的病例数及基因型种类不多。为此本研究对2011~2019年在广西壮族自治区妇幼保健院出生、行健康体检、住院，以及外院转诊的30 417例地中海贫血筛查阳性患儿进行基因检测，分析地中海贫血基因突变类型，并对部分患儿进行基因序列分析或跨越断裂点PCR检测，通过大样本分析以全面了解本地区儿童地中海贫血基因型，同时了解罕见基因型的发生情况，为地中海贫血患儿诊断、治疗及地中海贫血防控政策的不断完善提供资料。
1. 资料与方法
1.1. 研究对象
回顾性收集2011年1月至2019年12月在广西壮族自治区妇幼保健院出生、行健康体检、住院，以及外院转诊的地中海贫血筛查阳性患儿30 417例的临床资料，其中女11 184例，男19 233例，年龄生后1 h至14岁，平均年龄（4±3）岁。本研究获得广西壮族自治区妇幼保健院伦理委员会批准。
1.2. 筛查
采用血红细胞参数红细胞平均体积（mean corpuscular volume，MCV）、红细胞平均血红蛋白含量（mean corpuscular hemoglobin，MCH）联合血红蛋白分析进行地中海贫血初筛［1］。（1）MCV<80 fl和/或MCH<27 pg；（2）血红蛋白（hemoglobin，Hb）A2>3.5%和/或F>4.0%；（3）出现异常血红蛋白区带，若以上指标任一项异常均判为筛查阳性，并进行血清铁蛋白检测以排除缺铁性贫血引起的MCV和/或MCH降低。α地中海贫血表型判断：MCV<80 fl和/或MCH<27 pg，且HbA2≤3.5%和/或HbF≤4.0%，或出现HbH、HbCS及Hb Bart等异常血红蛋白；β地中海贫血表型判断：MCV<80 fl和/或MCH<27 pg，且HbA2>3.5%和/或HbF>4.0%，出现HbE等。
1.3. 基因诊断
采集患儿外周静脉血2 mL于乙二胺四乙酸二钾抗凝管，采用磁珠法提取基因组DNA，单管多重PCR扩增后经琼脂糖凝胶电泳检测α-地中海贫血3种常见缺失型基因（--SEA、-α3.7和-α4.2），分别采用单管多重PCR扩增后经反向点杂交技术进行α-地中海贫血3种基因突变（αCSα、αWSα及αQSα）和β地中海贫血17种常见基因突变（CD41-42、CD17、IVS-Ⅱ-654、CD26、CD71-72、IVS-I-1、-28、CD31、CD43、-29、CD27-28、CD14-15、-32、Int、IVS-I-5、-30和Cap）检测，上述α、β地中海贫血基因检测试剂盒购自深圳益生堂生物技术有限公司，严格按实验室操作程序进行检测、质量控制和结果判断，对上述基因检测阴性患儿2 703例进行跨越断裂点PCR（gap-PCR）检测和/或基因序列分析。
2. 结果
2.1. 地中海贫血基因诊断情况
30 417例地中海贫血筛查阳性患儿中，确诊地中海贫血23 214例（76.32%）；其中α、β及α合并β地中海贫血检出率分别为47.77%（14 531/30 417）、23.75%（7 223/30 417）和4.80%（1 460/30 417）。检出13种α地中海贫血等位基因共计18 480个，以--SEA为主（54.99%），包括7种罕见基因：--THAI、HKαα、-α30、-α21.9、-α2.4、-α1.0和HBA2∶C272-279 del（表1）。检出17种β地中海贫血等位基因共计9 168个，主要为CD41-42（47.79%），其次是CD17（25.53%），包括3种罕见基因：IVS-I-2、IVS-Ⅱ-5和Gγ(Aγδβ)0（表2）。
表1.
α地中海贫血等位基因分布
| 等位基因 | 表型 | n | 构成比(%) |
|---|---|---|---|
| 合计 | 18 480 | 100 | |
| --SEA | α0 | 10 162 | 54.99 |
| -α3.7 | α+ | 3 501 | 18.94 |
| αCSα | α+ | 1 708 | 9.24 |
| -α4.2 | α+ | 1 595 | 8.63 |
| αWSα | α+ | 1 179 | 6.38 |
| αQSα | α+ | 247 | 1.34 |
| --THAI | α0 | 80 | 0.43 |
| HKαα | α+ | 3 | 0.02 |
| -α30 | α+ | 1 | 0.01 |
| -α21.9 | α+ | 1 | 0.01 |
| -α2.4 | α+ | 1 | 0.01 |
| -α1.0 | α+ | 1 | 0.01 |
| HBA2: C272-279 del | α+ | 1 | 0.01 |
表2.
β地中海贫血等位基因分布
| 等位基因 | 表型 | n | 构成比 (%) |
|---|---|---|---|
| 合计 | 9 168 | 100 | |
| CD41-42 | β0 | 4 382 | 47.79 |
| CD17 | β0 | 2 340 | 25.53 |
| IVS-Ⅱ-654 | β0 | 684 | 7.46 |
| -28 | β+ | 625 | 6.82 |
| CD71-72 | β0 | 409 | 4.46 |
| CD26 | β+ | 375 | 4.09 |
| IVS-I-1 | β0 | 188 | 2.05 |
| CD43 | β0 | 94 | 1.03 |
| -29 | β+ | 26 | 0.28 |
| CD27-28 | β0 | 21 | 0.23 |
| CD14-15 | β0 | 9 | 0.10 |
| IVS-I-5 | β+ | 8 | 0.09 |
| IVS-Ⅱ-5 | β0 | 2 | 0.02 |
| Cap | β+ | 2 | 0.02 |
| IVS-I-2 | β0 | 1 | 0.01 |
| Int | β+ | 1 | 0.01 |
| Gγ(Aγδβ)0 | β+ | 1 | 0.01 |
2.2. α地中海贫血基因类型分布
14 531例α地中海贫血患儿中，检出巴氏水肿胎（--SEA/--SEA）12例（0.08%），HbH病（α0/α+）1 916例（13.19%），α地中海贫血基因携带者（α0或α+或α+/α+）12 603例（86.73%）。13种等位基因共37种基因类型，以--SEA/αα（52.20%）为主，其次为-α3.7/αα（13.24%）、αCSα/αα（7.52%）、-α4.2/αα（6.06%）、--SEA/-α3.7（5.91%）和αwsα/αα（3.41%），共占88.34%。另检出11种罕见基因类型共80例，其中--THAI/αα 55例（0.38%），--THAI引起的HbH病（α0/α+）17例（0.12%）。见表3。
表3.
14 531例儿童α地中海贫血基因类型分布
| 基因类型 | n | 构成比(%) | 基因类型 | n | 构成比(%) |
|---|---|---|---|---|---|
| --SEA/αα | 7 586 | 52.20 | -α4.2/αCSα | 22 | 0.15 |
| -α3.7/αα | 1 924 | 13.24 | -α4.2/-α4.2 | 19 | 0.13 |
| αCSα/αα | 1 093 | 7.52 | αCSα/αQSα | 12 | 0.08 |
| -α4.2/αα | 880 | 6.06 | --SEA/--SEA | 12 | 0.08 |
| --SEA/-α3.7 | 859 | 5.91 | -α3.7/αQSα | 11 | 0.08 |
| αWSα/αα | 496 | 3.41 | --THAI/-α3.7 | 6 | 0.04 |
| --SEA/-α4.2 | 388 | 2.67 | --THAI/-α4.2 | 5 | 0.03 |
| --SEA/αCSα | 334 | 2.30 | --THAI/αWSα | 3 | 0.02 |
| --SEA/αWSα | 282 | 1.94 | --THAI/αCSα | 3 | 0.02 |
| αQSα/αα | 164 | 1.13 | --SEA/HKαα | 3 | 0.02 |
| -α3.7/-α3.7 | 89 | 0.61 | -α4.2/αQSα | 3 | 0.02 |
| -α3.7/-α4.2 | 61 | 0.42 | αCSα/αWSα | 2 | 0.01 |
| -α3.7/αCSα | 57 | 0.39 | --SEA/-α2.4 | 1 | 0.01 |
| --THAI/αα | 55 | 0.38 | --SEA/-α1.0 | 1 | 0.01 |
| -α3.7/αWSα | 42 | 0.29 | --SEA/-α21.9 | 1 | 0.01 |
| αCSα/αCSα | 33 | 0.23 | αWSα/αQSα | 1 | 0.01 |
| --SEA/αQSα | 30 | 0.21 | -α30/αα | 1 | 0.01 |
| αWSα/αWSα | 28 | 0.19 | -α*/αα | 1 | 0.01 |
| -α4.2/αWSα | 23 | 0.16 | 合计 | 14 531 | 100 |
注：αα为野生型等位基因。*示α2基因C272-279位点8p缺失。
2.3. β地中海贫血基因类型分布
7 223例β地中海贫血患儿中，检出双重杂合子288例（3.99%），纯合子102例（1.41%）；检出16种等位基因共49种基因类型。6种主要基因类型：CD41-42/βN（45.81%）、CD17/βN（24.30%）、IVS-Ⅱ-654/βN （7.49%）、-28/βN（5.62%）、CD71-72/βN（4.42%）和CD26/βN（3.49%），共占91.13%；检出3种罕见基因类型，包括缺失型Gγ(Aγδβ)0/βN 1例，突变型IVS-Ⅱ-5/βN和IVS-Ⅱ-654/IVS-Ⅱ-5各1例。见表4。
表4.
7 223例儿童β地中海贫血基因类型分布
| 基因类型 | n | 构成比 (%) | 基因类型 | n | 构成比 (%) |
|---|---|---|---|---|---|
| CD41-42/βN | 3 309 | 45.81 | IVS-I-5/βN | 6 | 0.08 |
| CD17/βN | 1 755 | 24.30 | CD71-72/CD26 | 5 | 0.07 |
| IVS-Ⅱ-654/βN | 541 | 7.49 | CD17/IVS-I-1 | 3 | 0.04 |
| -28/βN | 406 | 5.62 | CD71-72/CD71-72 | 2 | 0.03 |
| CD71-72/βN | 319 | 4.42 | CD17/CD27-28 | 2 | 0.03 |
| CD26/βN | 252 | 3.49 | -28/CD26 | 2 | 0.03 |
| IVS-I-1/βN | 123 | 1.70 | -28/IVS-I-1 | 2 | 0.03 |
| CD41-42/CD41-42 | 85 | 1.18 | CD17/CD43 | 2 | 0.03 |
| CD41-42/CD17 | 75 | 1.04 | CD71-72/-28 | 2 | 0.03 |
| CD43/βN | 75 | 1.04 | IVS-Ⅱ-654/IVS-I-1 | 2 | 0.03 |
| CD41-42/-28 | 50 | 0.69 | CD41-42/CD43 | 2 | 0.03 |
| CD41-4/IVS-Ⅱ-654 | 23 | 0.32 | CD26/-29 | 1 | 0.01 |
| CD41-42/CD26 | 22 | 0.30 | IVS-Ⅱ-654/IVS-Ⅱ-654 | 1 | 0.01 |
| CD17/-28 | 20 | 0.28 | CD41-42/IVS-I-5 | 1 | 0.01 |
| -29/βN | 18 | 0.25 | CD41-42/Cap | 1 | 0.01 |
| CD27-28/βN | 17 | 0.24 | CD41-42/-29 | 1 | 0.01 |
| CD17/IVS-Ⅱ-654 | 15 | 0.21 | CD41-42/CD27-28 | 1 | 0.01 |
| CD17/CD26 | 14 | 0.19 | IVS-Ⅱ-654/IVS-Ⅱ-5 | 1 | 0.01 |
| CD41-42/CD71-72 | 13 | 0.18 | IVS-Ⅱ-654/CD26 | 1 | 0.01 |
| CD41-42/IVS-I-1 | 11 | 0.15 | -28/-29 | 1 | 0.01 |
| CD17/CD71-72 | 9 | 0.12 | IVS-Ⅱ-5/βN | 1 | 0.01 |
| CD14-15/βN | 8 | 0.11 | Gγ(Aγδβ)0/βN | 1 | 0.01 |
| -28/-28 | 7 | 0.10 | Int/βN | 1 | 0.01 |
| CD17/CD17 | 7 | 0.10 | Cap/βN | 1 | 0.01 |
| -28/IVS-Ⅱ-654 | 6 | 0.08 | 合计 | 7 223 | 100 |
注：βN为野生型等位基因。
2.4. α合并β地中海贫血基因类型分布
1 460例α合并β地中海贫血患儿中，检出α0/α+合并β地中海贫血134例，β地中海贫血双重杂合子（67例）和纯合子（26例）合并α地中海贫血93例，包括α0/α+合并β地中海贫血双重杂合子1例，临床表现为中度贫血；检出7种α和12种β地中海贫血等位基因共137种基因类型，主要为--SEA/αα合并CD41-42/βN（14.17%）、CD17/βN （8.35%）。见表5。
表5.
1 460例α合并β地中海贫血基因类型分布
| 基因类型 | n | 构成比(%) | 基因类型 | n | 构成比(%) | 基因类型 | n | 构成比(%) |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| --SEA/αα; CD41-42/βN | 207 | 14.17 | αQSα/αα; CD41-42/βN | 4 | 0.27 | --SEA/αα; -28/IVS-Ⅱ-654 | 1 | 0.07 |
| --SEA/αα; CD17/βN | 122 | 8.35 | --SEA/-α3.7; -28/βN | 3 | 0.21 | --SEA/αα; CD17/-28 | 1 | 0.07 |
| -α3.7/αα; CD41-42/βN | 119 | 8.15 | --SEA/-α4.2; -28/βN | 3 | 0.21 | --SEA/αα; CD17/CD17 | 1 | 0.07 |
| -α3.7/αα; CD17/βN | 104 | 7.12 | --SEA/αWSα; IVS-Ⅱ-654/βN | 3 | 0.21 | --SEA/αα; CD41-42/CD26 | 1 | 0.07 |
| αWSα/αα; CD41-42/βN | 94 | 6.43 | --SEA/αα; -29/βN | 3 | 0.21 | --SEA/αα; CD41-42/IVS-I-1 | 1 | 0.07 |
| αCSα/αα; CD41-42/βN | 53 | 3.63 | --SEA/αα; CD41-42/-28 | 3 | 0.21 | --SEA/αα; CD17/CD43 | 1 | 0.07 |
| αWSα/αα; CD17/βN | 51 | 3.49 | --SEA/αα; CD41-42/CD17 | 3 | 0.21 | --SEA/αα; CD17/CD71-72 | 1 | 0.07 |
| -α4.2/αα; CD41-42/βN | 50 | 3.42 | --SEA/αα; CD43/βN | 3 | 0.21 | --SEA/αα; CD17/IVS-I-1 | 1 | 0.07 |
| --SEA/αα; -28/βN | 49 | 3.35 | --THAI/-α3.7; CD17/βN | 3 | 0.21 | --THAI/αα; -28/βN | 1 | 0.07 |
| --SEA/αα; CD26/βN | 36 | 2.46 | -α4.2/αα; CD41-42/-28 | 3 | 0.21 | --THAI/αα; CD41-42/βN | 1 | 0.07 |
| -α4.2/αα; CD17/βN | 34 | 2.32 | -α4.2/αα; IVS-I-1/βN | 3 | 0.21 | --THAI/αα; IVS-I-1/βN | 1 | 0.07 |
| αCSα/αα; CD17/βN | 31 | 2.12 | αCSα/αQSα; CD41-42/βN | 3 | 0.21 | -α3.7/-α3.7; CD17/βN | 1 | 0.07 |
| --SEA/-α3.7; CD41-42/βN | 30 | 2.05 | αCSα/αα; CD71-72/βN | 3 | 0.21 | -α3.7/-α4.2; CD17/βN | 1 | 0.07 |
| --SEA/αα; IVS-Ⅱ-654/βN | 29 | 1.98 | αCSα/αα; IVS-I-1/βN | 3 | 0.21 | -α3.7/-α4.2; IVS-I-1/βN | 1 | 0.07 |
| --SEA/αCSα; CD41-42/βN | 20 | 1.37 | αWSα/αα; CD41-42/CD17 | 3 | 0.21 | -α3.7/-α4.2; CD41-42/βN | 1 | 0.07 |
| --SEA/αα; CD71-72/βN | 19 | 1.30 | αWSα/αα; CD41-42/IVS-Ⅱ-654 | 3 | 0.21 | -α3.7/αCSα; CD26/βN | 1 | 0.07 |
| -α3.7/αα; -28/βN | 17 | 1.16 | -α3.7/αα; CD17/-28 | 3 | 0.21 | -α3.7/αα; -29/βN | 1 | 0.07 |
| αWSα/αα; IVS-Ⅱ-654/βN | 15 | 1.02 | --SEA/-α3.7; CD71-72/βN | 2 | 0.14 | -α3.7/αα; CD17/CD26 | 1 | 0.07 |
| --SEA/αα; IVS-I-1/βN | 14 | 0.95 | --SEA/-α4.2; IVS1-1/βN | 2 | 0.14 | -α3.7/αα; CD41-42/CD71-72 | 1 | 0.07 |
| --SEA/-α4.2; CD17/βN | 14 | 0.95 | --SEA/αQSα; CD41-42/βN | 2 | 0.14 | -α3.7/αα; CD41-42/IVS-Ⅱ-654 | 1 | 0.07 |
| -α3.7/αα; IVS-Ⅱ-654/βN | 14 | 0.95 | --SEA/αWSα; CD26/βN | 2 | 0.14 | -α3.7/αα; IVS-Ⅱ-654/-28 | 1 | 0.07 |
| -α3.7/αα; CD26/βN | 12 | 0.82 | --SEA/αα; CD41-42/IVS-Ⅱ-654 | 2 | 0.14 | -α3.7/αα; CD17/IVS-Ⅱ-654 | 1 | 0.07 |
| --SEA/-α4.2; CD41-42/βN | 11 | 0.75 | --THAI/αα; CD17/βN | 2 | 0.14 | -α3.7/αα; IVS-I-5/βN | 1 | 0.07 |
| --SEA/αCSα; CD17/βN | 11 | 0.75 | -α3.7/-α3.7; CD41-42/βN | 2 | 0.14 | -α4.2/-α4.2; CD41-42/βN | 1 | 0.07 |
| --SEA/αα; CD41-42/CD41-42 | 11 | 0.75 | -α3.7/αCSα; CD41-42/βN | 2 | 0.14 | -α4.2/αCSα; CD26/βN | 1 | 0.07 |
| αCSα/αα; IVS-Ⅱ-654/βN | 11 | 0.75 | -α3.7/αWSα; CD41-42/βN | 2 | 0.14 | -α4.2/αCSα; CD41-42/CD71-72 | 1 | 0.07 |
| -α3.7/αα; CD71-72/βN | 10 | 0.68 | -α4.2/αα; CD17/-28 | 2 | 0.14 | -α4.2/αCSα; CD41-42/βN | 1 | 0.07 |
| -α4.2/αα; -28/βN | 10 | 0.68 | -α4.2/-α4.2; CD17/βN | 2 | 0.14 | -α4.2/αα; CD41-42/CD17 | 1 | 0.07 |
| --SEA/αWSα; CD41-42/βN | 9 | 0.62 | -α4.2/αα; CD17/CD17 | 2 | 0.14 | -α4.2/αα; CD41-42/CD26 | 1 | 0.07 |
| -α3.7/αα; CD41-42/CD17 | 9 | 0.62 | -α4.2/αα; CD43/βN | 2 | 0.14 | -α4.2/αα; CD41-42/CD43 | 1 | 0.07 |
| -α4.2/αα; IVS-Ⅱ-654/βN | 9 | 0.62 | αCSα/αCSα; CD41-42/βN | 2 | 0.14 | -α4.2/αα; CD71-72/CD71-72 | 1 | 0.07 |
| -α4.2/αα; CD26/βN | 9 | 0.62 | αCSα/αα; CD17/CD17 | 2 | 0.14 | αCSα/αCSα; -28/βN | 1 | 0.07 |
| -α3.7/αα; IVS-I-1/βN | 8 | 0.55 | αCSα/αα; CD41-42/CD41-42 | 2 | 0.14 | αCSα/αα; -29/βN | 1 | 0.07 |
| αwsα/αα; CD71-72/βN | 8 | 0.55 | αCSα/αα; CD26/βN | 2 | 0.14 | αCSα/αα; CD41-42/IVS-I-1 | 1 | 0.07 |
| --SEA/αwsα; CD17/βN | 7 | 0.48 | αQSα/αα; IVS-Ⅱ-654/βN | 2 | 0.14 | αCSα/αα; CD41-42/CD71-72 | 1 | 0.07 |
| -α3.7/αα; CD43/βN | 7 | 0.48 | αWSα/αα; CD41-42/CD26 | 2 | 0.14 | αCSα/αα; IVS-I-2/βN | 1 | 0.07 |
| αWSα/αα; IVS-I-1/βN | 7 | 0.48 | αWSα/αα; CD41-42/IVS-I-1 | 2 | 0.14 | αQSα/αα; -28/βN | 1 | 0.07 |
| -α3.7/αα; CD41-42/-28 | 6 | 0.41 | --SEA/αα; CD14-15/βN | 1 | 0.07 | αQSα/αα; CD17/CD17 | 1 | 0.07 |
| -α3.7/αα; CD41-42/CD41-42 | 5 | 0.34 | --SEA/-α3.7; -28/IVS-I-1 | 1 | 0.07 | αQSα/αα; CD43/βN | 1 | 0.07 |
| αcsα/αα; -28/βN | 5 | 0.34 | --SEA/-α3.7; CD26/βN | 1 | 0.07 | αQSα/αα; CD71-72/βN | 1 | 0.07 |
| αWSα/αα; -28/βN | 5 | 0.34 | --SEA/-α3.7; IVS-I-1/βN | 1 | 0.07 | αWSα/αα; CD17/CD26 | 1 | 0.07 |
| αWSα/αα; CD26/βN | 5 | 0.34 | --SEA/-α4.2; CD26/βN | 1 | 0.07 | αWSα/αα; CD27-28/βN | 1 | 0.07 |
| -α4.2/αα; CD71-72/βN | 5 | 0.34 | --SEA/αCSα; -28/βN | 1 | 0.07 | αWSα/αα; CD26/CD71-72 | 1 | 0.07 |
| --SEA/αWSα; CD71-72/βN | 4 | 0.27 | --SEA/αCSα; CD26/βN | 1 | 0.07 | αWSα/αα; CD41-42/-28 | 1 | 0.07 |
| αCSα/αα; CD41-42/CD17 | 4 | 0.27 | --SEA/αCSα; IVS-Ⅱ-654/βN | 1 | 0.07 | αWSα/αα; CD41-42/CD41-42 | 1 | 0.07 |
| αQSα/αα; CD17/βN | 4 | 0.27 | --SEA/αWSsα; -28/βN | 1 | 0.07 | 合计 | 1 460 | 100 |
3. 讨论
地中海贫血主要发生在我国长江以南各省，广西、广东是地中海贫血的高发区，且其在不同地区及种族人群中的发生率、基因分布也有一定差异［5］。广西是壮族自治区，95%的壮族人群居住在广西，壮族人群约占总人口数的32%［6］，因此研究本地区人群中地中海贫血基因类型有重要意义。本研究在30 417例地中海贫血筛查阳性患儿中检出地中海贫血患儿23 214例，检出率为76.32%，国内报道疑似患儿中地中海贫血检出率为31.92%~88.84%［7-8］，这与研究人群、筛查方案等不同有关。同时也与是否排除缺铁性贫血或葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏等有关，更重要的是本地区儿童地中海贫血筛查多采用成人参考指标，这势必会降低检出率；因此有必要建立儿童地中海贫血筛查及诊断方案，以减少不必要的基因检测，降低临床成本。本研究中α地中海贫血仍是主要类型，占62.60%，与以往及国内多数报道相似［8-11］，而云南地区报道贫血儿童中β地中海贫血占53.98%［7］。
已报道的α、β地中海贫血基因分别超过100种、800种，我国报道的α、β地中海贫血基因也分别超过30种、60种［12］。本研究在23 214例地中海贫血患儿中检出α、β地中海贫血基因分别为13种、17种，在18 480个α地中海贫血等位基因中，主要为--SEA（54.99%），其次为-α3.7（18.94%）和αCSα（9.24%）；在7种罕见等位基因中，--THAI占0.43%，广东湛江地区、福建泉州地区分别报道检出该基因1例和2例［13-14］，提示该基因在本地区人群中并不罕见，应作为α地中海贫血表型患儿常规检测基因。在9 168个β地中海贫血等位基因中，以CD41-42为主（47.79%），其次为CD17（25.53%），与重庆、广东地区报道相似［15］，而福建地区以IVS-Ⅱ-654为主［15］，云南地区以CD17为主［7］。
流行病学调查［15］显示α地中海贫血主要为缺失型--SEA/αα，占57.1%~84.4%，其次为-α3.7/αα和-α4.2/αα。本研究在14 531例α地中海贫血患儿中检出等位基因13种共37种基因类型，其中--SEA/αα最为常见，占52.20%，略低于国内报道［16］，这可能与HbH病检出比例较高有关；同时αCSα/αα（7.52%）高于-α4.2/αα（6.06%），这与该类患儿更易发生贫血和毛细管电泳对Hb的H、CS条带有较高的识别率相关［17］。有研究采用脐带血或新生儿干血斑筛查α地中海贫血对HbH病均有极高的检出率，因此有必要对新生儿进行α地中海贫血筛查，以便对HbH病患儿做到早诊断、早治疗，防止贫血程度的进展，提高患儿的生活质量［17-18］。值得注意的是本研究中检出巴氏水肿胎（--SEA/--SEA）12例，均在2011年被发现［10，19］，这表明2010年之后的防控体系能有效地控制重型α地中海贫血患儿的出生。
β地中海贫血多是点突变，国内最常见的突变是CD41-42、CD17、-28和IVS-Ⅱ-654［15］。本研究在7 223例β地中海贫血患儿中共检出16种等位基因共49种基因类型，主要类型为CD41-42/βN，其次为CD17/βN、IVS-Ⅱ-654/βN、-28/βN、CD71-72/βN和CD26/βN ，占所有基因类型的91.13%；这与国内其他地区报道相似［7，15］，但各基因型构成在不同地区存在一定差异。另检测出罕见突变型IVS-Ⅱ-5/βN和IVS-Ⅱ-654/IVS-Ⅱ-5各1例，1例罕见缺失型Gγ(Aγδβ)0/βN。以往在成人中已报道过因缺失型Gγ(Aγδβ)0引起的重度地中海贫血而进行产前诊断的病例［20］，结果提示为避免漏检罕见基因型，应对有β地中海贫血表型而常规基因检测阴性患儿进行基因序列分析或gap-PCR检测。黄烁丹等［21］研究显示采用毛细管电泳技术检测新生儿干血斑HbA筛查β地中海贫血，能有效地检出中重型β地中海贫血。本研究中有393例患儿为中重型β地中海贫血，且多以出现不同程度的贫血而被发现［10］，结果提示目前的地中海贫血防控措施不能有效地避免中重型β地中海贫血患儿的出生，应该引起相关部门的重视；同时为了做到对中重型β地中海贫血患儿早期诊断、治疗及改善生活质量，应加强新生儿β地中海贫血筛查。
有研究显示α合并β地中海贫血患儿在出生时血液学多表现为α地中海贫血特点，随着β珠蛋白表达增加，2岁后其血液学多表现为β地中海贫血特点，但其贫血情况较单纯α或β地中海贫血轻，且中间型α地中海贫血合并中重型β地中海贫血临床表现为轻度或中度贫血，无需输血治疗［22-23］。本研究中4.80%的儿童诊断为α合并β地中海贫血，检出7种α和12种β地中海贫血等位基因共137种基因类型，主要是--SEA/αα合并CD41-42/βN（14.17%）、CD17/βN（8.35%），与本地区其他报道相似［10，19］。值得注意的是发现α0/α+地中海贫血合并β地中海贫血134例，β地中海贫血双重杂合子、纯合子合并α地中海贫血92例，包括α0/α+地中海贫血合并β地中海贫血双重杂合子1例，该病例表现为中度贫血；结果提示地中海贫血高风险地区，为检出α合并β地中海贫血有必要对确诊的β地中海贫血患儿进行α地中海贫血基因检测。
广西地区儿童中，地中海贫血基因突变及其类型多样，α地中海贫血仍是主要的类型，其中--SEA/αα是主要基因类型，β地中海贫血主要基因类型为CD41-42/βN，α合并β地中海贫血所占比例极高。值得注意的是本地区检出罕见基因超过10种，其中缺失型--THAI占α地中海贫血基因的0.43%，提示该基因在人群的携带率并不低，有必要将其纳入常规检测的基因类型。2011年后未发现重型α地中海贫血患儿出生，但中重型β地中海贫血患儿所占比例较高，因此有必要开展新生儿筛查，对筛查阳性患儿行基因诊断，以做到早诊断、早治疗，以便提高该类患儿的生活质量。同时，应加强育龄高风险人群基因诊断和产前诊断，这对降低本地区该类患儿出生有重要意义。
基金资助
国家自然科学基金（81660034）；中央引导地方财政专项基金（桂科ZY1949010）。
利益冲突声明
所有作者均声明不存在利益冲突。
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