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. 2019 Jun 25;48(3):296–302. [Article in Chinese] doi: 10.3785/j.issn.1008-9292.2019.06.10

大剂量维生素C通过减少糖酵解和蛋白质合成抑制乳腺癌细胞增殖

High dose vitamin C inhibits proliferation of breast cancer cells through reducing glycolysis and protein synthesis

Qingmei WANG 1,*, Qianzi XU 1, Anyi WEI 1, Shishuo CHEN 1, Chong ZHANG 1,*, Linghui ZENG 1,*
PMCID: PMC8800810  PMID: 31496162

Abstract

目的

观察大剂量维生素C对乳腺癌细胞增殖及荷瘤小鼠肿瘤生长的影响,并探索其中的机制。

方法

以乳腺癌细胞Bcap37和MDA-MB-453为体外研究对象,分别给予小(0.01 mmol/L)、中(0.10 mmol/L)、大(2.00 mmol/L)剂量的维生素C。采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖;蛋白质印迹法检测葡萄糖转运蛋白1(Glut1)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白表达;乳酸脱氢酶比色法测定乳酸含量。同时,取10只6周龄雌性BALB/c裸鼠,采用皮下接种乳腺癌Bcap37细胞建立荷瘤小鼠移植瘤模型,取5只小鼠腹腔注射维生素C(4 g/kg),观察肿瘤重量和小鼠体质量的变化。

结果

体外细胞学实验结果显示,与空白对照组比较,大剂量维生素C作用下Bcap37和MDA-MB-453细胞增殖受到抑制(均 P < 0.01),Glut1转运蛋白表达减少(均 P < 0.05),乳酸分泌量减少(均 P < 0.01),mTOR信号通路相关蛋白表达水平下调(均 P < 0.05)。体内实验结果显示,与对照组比较,大剂量维生素C组肿瘤重量明显减小( P < 0.05),但体质量增长无明显变化。

结论

大剂量维生素C可抑制乳腺癌细胞增殖,这一效果可能与大剂量维生素C抑制乳腺癌细胞能量摄取和下调mTOR信号通路有关。


近年来我国肿瘤的发生率和病死率呈上升趋势,2015年我国新增肿瘤患者400多万例,因肿瘤死亡患者近300万例。在我国,乳腺癌的发病占所有恶性肿瘤的26.86%,位居女性恶性肿瘤的首位 [ 1- 2] 。目前,随着社会、经济、自然环境等诸多因素的变化,乳腺癌的发病率在全球范围内迅速增加,仅10年时间总发病率提高了近10倍 [ 3]

维生素C是一种水溶性维生素,人类自身不能合成,需要通过水果和蔬菜等食物补充。早在十六世纪,人类就有通过补充维生素C预防坏血病的经验 [ 4] 。近年研究表明,维生素C在治疗乳腺癌、前列腺癌、皮肤癌等多种肿瘤上具有很大的潜力,患者静脉注射维生素C 7.5~50.0 g,前列腺特异性抗原、癌胚抗原等肿瘤标志物和炎症因子表达水平下降 [ 5] 。但是,目前关于维生素C对肿瘤的治疗作用,特别是大剂量维生素C治疗肿瘤的具体给药剂量及改善患者症状的机制尚未明确。

细胞代谢发生改变是肿瘤细胞在肿瘤发生过程中的特征之一 [ 6] 。肿瘤细胞糖酵解活动增强 [ 7] , 葡萄糖消耗增加、糖酵解活性增加及乳酸的积累构成了肿瘤细胞的基本特征 [ 8] 。葡萄糖转运蛋白1(glucose transporter 1,Glut1)是负责转运氧化型维生素C和葡萄糖的重要转运蛋白,在乳腺癌、肝癌、非小细胞肺癌等多种肿瘤组织中均观察到Glut1表达水平增加,其表达量也成为肿瘤的重要预后指标 [ 9] 。另外,肿瘤的发生和发展过程中常常伴随哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路激活 [ 10] 。mTOR作为一种丝氨酸/苏氨酸激酶,具有调控蛋白质合成的作用, 并参与多种生理过程(如细胞生长、增殖和修复等) [ 11- 13]

本研究通过检测相关蛋白质表达量和乳酸含量, 从糖酵解和mTOR信号通路两个方面探讨不同剂量维生素C对乳腺癌细胞Bcap37和MDA-MB-453的影响。

1 材料与方法

1.1 细胞、动物与试剂

人乳腺癌细胞Bcap37和MDA-MB-453来自浙江大学医学院肿瘤研究所。6周龄雌性BALB/c裸鼠购自上海斯莱克实验动物有限公司,动物许可证号为SCXK(沪)2012-0002。按照浙江大学医学院动物实验室管理规范进行实验。动物的饲养条件为温度25 ℃,湿度50%~60%,昼、夜各12 h,自由进食和饮水。

维生素C为美国Sigma公司产品,使用前用RPMI 1640培养基(美国Hyclone公司)溶解并使用10 mol/L氢氧化钠溶液调节酸碱度至7。Glut1兔单克隆抗体、血小板型磷酸果糖激酶(phosphofructokinase-platelet,PFKP)兔单克隆抗体、mTOR抗体、p70 S6激酶(S6K)抗体、S6核糖体蛋白兔单克隆抗体、磷酸化mTOR抗体、磷酸化p70 S6K抗体、磷酸化S6核糖体蛋白抗体和内参抗体GAPDH为美国Cell Signaling Technology公司产品;乳酸试剂盒为南京建成生物工程研究所有限公司产品。

1.2 细胞培养

Bcap37和MDA-MB-453细胞用含10%FBS、1%青/链霉素的RPMI 1640培养基培养。将细胞置于37 ℃、含5%二氧化碳的恒温孵箱中,待细胞融合至80%~90%时使用胰蛋白酶消化传代。

1.3 CCK8试剂盒检测细胞增殖

取生长状态良好的Bcap37和MDA-MB-453细胞,收集细胞悬液,调整至1×10 4个/mL,接种于96孔板中,每孔100 μL,加入小(0.01 mmol/L)、中(0.10 mmol/L)、大(2.00 mmol/L)剂量的维生素C,隔天换液,连续给药6 d,未经维生素C处理的细胞作为空白对照。检测肿瘤细胞培养液在第0、2、4、6天时的吸光度值。具体操作:去原培养基,每孔加入100 μL新鲜培养基,并加入CCK8溶液(10 μL/孔),放置孵箱中继续培养1 h,然后在450 nm处读取吸光度值,并绘制生长曲线。

1.4 蛋白质印迹法检测Glut1和mTOR信号通路相关蛋白表达

将生长状态良好的Bcap37细胞和MDA-MB-453细胞接种到6孔板中,贴壁后给予小(0.01 mmol/L)、中(0.10 mmol/L)、大(2.00 mmol/L)剂量的维生素C作用24 h,未经维生素C处理的细胞作为空白对照。使用蛋白裂解液收集总蛋白,BCA蛋白浓度检测试剂盒测定其蛋白浓度,调整总蛋白上样量为50 μg,经10%SDS-PAGE后将蛋白转移至硝酸纤维素膜。将膜用5%脱脂牛奶封闭1 h后加入Glut1、PFKP、磷酸化mTOR、磷酸化S6K、磷酸化S6、mTOR、S6K、S6或GAPDH一抗(1:1000稀释),置于摇床上4 ℃孵育过夜。洗膜后加入相应的二抗(1:10 000稀释),室温孵育1 h,Odyssey红外激光双色图像分析系统扫描得蛋白表达量,并用ImageJ软件对蛋白条带进行灰度分析。

1.5 乳酸脱氢酶比色法测定糖酵解产物乳酸

将生长状态良好的Bcap37细胞和MDA-MB-453细胞接种到24孔板中,给予小(0.01 mmol/L)、中(0.10 mmol/L)、大(2.00 mmol/L)剂量的维生素C作用48 h,未经维生素C处理的细胞作为空白对照。取培养基上清液,按照乳酸检查试剂盒说明书的步骤测定乳酸含量。

1.6 称量荷瘤裸鼠体质量及肿瘤质量

裸鼠移植瘤模型的建立:收集生长状态良好的Bcap37细胞,按照1×10 6个/只的密度皮下接种到裸鼠(共10只)腋下,一周后肿瘤生长至肉眼可见。实验动物随机分为对照组和观察组,每组5只,观察组给予大剂量(4 g/kg)维生素C腹腔注射,对照组给予等渗氯化钠溶液。每天给药1次,连续给药24 d,记录小鼠体质量。给药结束后处死裸鼠,剥离肿瘤并称重。

1.7 统计学方法

采用SPSS 15.0软件进行统计学分析。计量数据用均数±标准差( x ± s)表示,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用Dunnett- t检验, P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 大剂量维生素C抑制乳腺癌细胞增殖

乳腺癌细胞Bcap37和MDA-MB-453经维生素C作用0、2、4、6 d后,与空白对照组比较,小剂量维生素C可以增强Bcap37和MDA-MB-453细胞的增殖能力,其中对Bcap37细胞增殖能力的影响更为显著( P < 0.01);中剂量维生素C对两种乳腺癌细胞增殖均有促进作用( P < 0.01或 P < 0.05);而大剂量维生素C对两种乳腺癌细胞增殖均有抑制作用(均 P < 0.01),如 图 1所示。结果提示,不同剂量维生素C对乳腺癌细胞增殖的影响不同,大剂量维生素C可抑制乳腺癌细胞增殖。

图1.

不同剂量维生素C作用2、4、6 d乳腺癌细胞增殖情况

A:Bcap37细胞的吸光度随时间变化的曲线;B:MDA-MB-453细胞的吸光度随时间变化的曲线.吸光度值反应细胞数量,吸光度值越大表明细胞数量越多.与空白对照组比较, * P < 0.05, ** P < 0.01.

图1

2.2 大剂量维生素C抑制乳腺癌细胞糖酵解

维生素C在培养基中的半衰期约1.5 h,肿瘤细胞利用维生素C的方式主要是通过Glut1转运氧化型维生素C进入细胞 [ 14] 。如 图 2所示,在乳腺癌细胞Bcap37和MDA-MB-453中,小剂量维生素C对两种细胞系Glut1的表达无显著影响;中剂量维生素C对Bcap37细胞Glut1的表达有上调作用;而大剂量维生素C对两种细胞系Glut1的表达均有抑制作用(均 P < 0.05)。PFKP的表达量检测结果显示,不同剂量的维生素C对PFKP的表达并未产生明显影响。乳酸检测结果显示,在乳腺癌细胞Bcap37和MDA-MB-453中,小剂量和中剂量维生素C对乳酸分泌未见明显影响;但在大剂量维生素C作用下,乳酸分泌量减少( P < 0.01),见 图 3。以上结果提示,大剂量维生素C通过抑制Glut1表达,减少细胞摄入氧化型维生素C,使糖酵解过程中的底物含量降低,从而抑制乳腺癌细胞糖酵解。在这个过程中,糖酵解关键酶的活性未改变。

图2.

不同剂量维生素C作用后乳腺癌细胞Glut1和PFKP蛋白表达变化

A、B:Bcap37细胞Glut1和PFKP蛋白电泳代表性条带和统计分析;C、D:MDA-MB-453细胞Glut1和PFKP蛋白电泳代表性条带和统计分析.与空白对照组比较, * P < 0.05.Glut1:葡萄糖转运蛋白1;GAPDH:甘油醛-3-磷酸脱氢酶;PFKP:血小板型磷酸果糖激酶.

图2

图3.

不同剂量维生素C作用48 h乳腺癌细胞乳酸分泌量变化

与空白对照组比较, ** P < 0.01.

图3

2.3 大剂量维生素C通过下调mTOR信号通路抑制乳腺癌细胞增殖

与空白对照组比较,乳腺癌细胞Bcap37和MDA-MB-453在小剂量和中剂量维生素C作用下,mTOR、S6K和S6蛋白磷酸化水平未见明显变化;但在大剂量维生素C作用下,S6K和S6蛋白磷酸化水平下调(均 P < 0.01),尤其在Bcap37细胞中更为明显,见 图 4。结果提示,大剂量维生素C可以通过下调mTOR信号通路抑制蛋白质合成,从而抑制乳腺癌细胞增殖。

图4.

不同剂量维生素C对乳腺癌细胞中mTOR信号通路的影响

A、B:Bcap37细胞中mTOR信号通路相关蛋白电泳代表性条带和统计分析;C、D:MDA-MB-453细胞中mTOR信号通路相关蛋白电泳代表性条带和统计分析.与空白对照组比较, * P < 0.05, ** P < 0.01.mTOR:哺乳动物雷帕霉素靶蛋白;S6K:S6激酶.

图4

2.4 大剂量维生素C抑制荷瘤裸鼠肿瘤组织生长

荷瘤动物模型在经过连续24 d的维生素C治疗后,与对照组[(3.99±0.34)g]比较,大剂量维生素C可以抑制肿瘤生长[(2.70±0.22)g, P < 0.05, 图 5],但两组荷瘤裸鼠体质量增长差异无统计学意义( 图 6)。结果提示,大剂量维生素C可以抑制荷瘤小鼠肿瘤组织生长,且未见明显不良反应。

图5.

图5

大剂量维生素C作用后肿瘤大体观

图6.

图6

大剂量维生素C作用后裸鼠体质量变化

3 讨论

维生素C作为人体必需的营养物质,大量临床研究显示其在治疗肿瘤方面有效且不良反应较小 [ 15- 17] 。Cameron等 [ 18] 最早将维生素C用于肿瘤治疗,给予患者每日静脉输注10 g维生素C,连续10 d,随后每日口服8~10 g维生素C,接受治疗的50例患者中48%的患者出现症状缓解。随后,Cameron等 [ 19] 又进行了一项对100例晚期肿瘤患者使用静脉注射大剂量维生素C(10 g/d)治疗肿瘤的试验,发现与未接受维生素C治疗的患者比较,接受大剂量维生素C治疗的患者平均寿命延长了约300 d。但是,Moertel等 [ 20] 和Creagan等 [ 21] 分别设计双盲试验,给予患者每日口服10 g维生素C,并未发现上述治疗效果。因此,维生素C在肿瘤治疗中的作用仍存在争议, 需要更多的实验来证实。

在肿瘤生长过程中,肿瘤细胞快速分裂、增殖,常常造成肿瘤组织内部呈缺氧状态,肿瘤细胞因此关闭了线粒体的有氧氧化,能量由葡萄糖的无氧酵解提供,葡萄糖代谢为丙酮酸后不再通过线粒体的三羧酸循环进行有氧氧化,而通过乳酸脱氢酶转变为乳酸排出细胞 [ 7] 。本研究中,大剂量维生素C作用于乳腺癌细胞后,转运葡萄糖的Glut1转运蛋白表达减少,且无氧酵解终产物乳酸含量明显下降,表明大剂量维生素C具有抑制无氧酵解的作用。本研究并未发现大剂量维生素C明显改变糖酵解关键酶PFKP的表达量,因此维生素C可能主要通过下调Glut1转运体,减少糖酵解所需反应底物葡萄糖,导致肿瘤细胞能量利用降低。

肿瘤细胞的快速增殖需要大量蛋白质合成,mTOR信号通路是细胞增殖分化以及蛋白质合成的重要信号通路 [ 22- 24] ,与细胞的增殖密切相关。本文资料显示,大剂量维生素C下调了mTOR信号通路中多种磷酸化蛋白的表达,包括mTOR、S6K和S6的蛋白表达,提示维生素C对肿瘤细胞增殖的抑制作用与抑制mTOR信号通路相关。mTOR信号通路是复杂的信号系统,受到多种正反馈和负反馈调控。本研究中并未对mTOR信号通路的其他靶点如PI3K-AKT、Gsk3和PDK等进行检测,将在今后的研究中进一步深入探讨。

综上所述,大剂量维生素C通过抑制糖酵解和蛋白质合成的方式抑制了乳腺癌细胞的增殖,从能量和蛋白质合成角度解释了大剂量维生素C作用下细胞增殖受到抑制的部分机制,同时为抗肿瘤药物的靶点研究和精准调控提供了思路。虽然本研究中产生肿瘤抑制作用的维生素C剂量在体外研究中高达2 mmol/L,与此相对应的体内剂量为4 g/kg,但并未对模型动物的体质量产生明显影响,提示维生素C不同于其他肿瘤化疗药物,大剂量下并未发现明显不良反应。但是,维生素C对肿瘤的选择性杀死作用依然存在许多未解之谜,找到维生素C发挥抗肿瘤的关键环节将有利于设计治疗肿瘤的靶向药物,也是未来研究维生素C治疗肿瘤的核心。

Funding Statement

杭州市重大科技创新项目(20152013A02)

References

  • 1.CHEN W, ZHENG R, BAADE P D, et al. Cancer statistics in China, 2015. CA Cancer J Clin. 2016;66(2):115–132. doi: 10.3322/caac.21338. [CHEN W, ZHENG R, BAADE P D, et al. Cancer statistics in China, 2015[J]. CA Cancer J Clin, 2016, 66(2):115-132.] [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
  • 2.BRAY F, JEMAL A, GREY N, et al. Global cancer transitions according to the Human Development Index(2008-2030):a population-based study. Lancet Oncol. 2012;13(8):790–801. doi: 10.1016/S1470-2045(12)70211-5. [BRAY F, JEMAL A, GREY N, et al. Global cancer transitions according to the Human Development Index(2008-2030):a population-based study[J]. Lancet Oncol, 2012, 13(8):790-801.] [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
  • 3.HAO C, WANG Z, GU Y, et al. Prognostic value of osteopontin splice variant-c expression in breast cancers:a meta-analysis. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4947640/ Biomed Res Int. 2016;2016:7310694. doi: 10.1155/2016/7310694. [HAO C, WANG Z, GU Y, et al. Prognostic value of osteopontin splice variant-c expression in breast cancers:a meta-analysis[J]. Biomed Res Int, 2016, 2016:7310694.] [DOI] [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]
  • 4.MARTINI E. Jacques Cartier witnesses a treatment for scurvy. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12422875. Vesalius. 2002;8(1):2–6. [MARTINI E. Jacques Cartier witnesses a treatment for scurvy[J]. Vesalius, 2002, 8(1):2-6.] [PubMed] [Google Scholar]
  • 5.MIKIROVA N, CASCIARI J, ROGERS A, et al. Effect of high-dose intravenous vitamin C on inflammation in cancer patients. J Transl Med. 2012;10:189. doi: 10.1186/1479-5876-10-189. [MIKIROVA N, CASCIARI J, ROGERS A, et al. Effect of high-dose intravenous vitamin C on inflammation in cancer patients[J]. J Transl Med, 2012, 10:189.] [DOI] [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]
  • 6.HANAHAN D, WEINBERG R A. Hallmarks of cancer:the next generation. Cell. 2011;144(5):646–674. doi: 10.1016/j.cell.2011.02.013. [HANAHAN D, WEINBERG R A. Hallmarks of cancer:the next generation[J]. Cell, 2011, 144(5):646-674.] [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
  • 7.WARBURG O. On the origin of cancer cells. Science. 1956;123(3191):309–314. doi: 10.1126/science.123.3191.309. [WARBURG O. On the origin of cancer cells[J]. Science, 1956, 123(3191):309-314.] [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
  • 8.NGO D C, VERVERIS K, TORTORELLA S M, et al. Introduction to the molecular basis of cancer metabolism and the Warburg effect. Mol Biol Rep. 2015;42(4):819–823. doi: 10.1007/s11033-015-3857-y. [NGO D C, VERVERIS K, TORTORELLA S M, et al. Introduction to the molecular basis of cancer metabolism and the Warburg effect[J]. Mol Biol Rep, 2015, 42(4):819-823.] [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
  • 9.VOLLBRACHT C, SCHNEIDER B, LEENDERT V, et al. Intravenous vitamin C administration improves quality of life in breast cancer patients during chemo-/radiotherapy and aftercare:results of a retrospective, multicentre, epidemiological cohort study in Germany. https://www.researchgate.net/publication/51737042_Intravenous_Vitamin_C_Administration_Improves_Quality_of_Life_in_Breast_Cancer_Patients_during_Chemo-Radiotherapy_and_Aftercare_Results_of_a_Retrospective_Multicentre_Epidemiological_Cohort_Study_in_G. In Vivo. 2011;25(6):983–990. [VOLLBRACHT C, SCHNEIDER B, LEENDERT V, et al. Intravenous vitamin C administration improves quality of life in breast cancer patients during chemo-/radiotherapy and aftercare:results of a retrospective, multicentre, epidemiological cohort study in Germany[J]. In Vivo, 2011, 25(6):983-990.] [PubMed] [Google Scholar]
  • 10.CONCIATORI F, CIUFFREDA L, BAZZICHETTO C, et al. mTOR cross-talk in cancer and potential for combination therapy[J/OL]. Cancers(Basel), 2018, 10(1). pii: E23. https://www.researchgate.net/publication/322625361_mTOR_Cross-Talk_in_Cancer_and_Potential_for_Combination_Therapy. . [DOI] [PMC free article] [PubMed]
  • 11.WULLSCHLEGER S, LOEWITH R, HALL M N. TOR signaling in growth and metabolism. Cell. 2006;124(3):471–484. doi: 10.1016/j.cell.2006.01.016. [WULLSCHLEGER S, LOEWITH R, HALL M N. TOR signaling in growth and metabolism[J]. Cell, 2006, 124(3):471-484.] [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
  • 12.DAZERT E, HALL M N. mTOR signaling in disease. Curr Opin Cell Biol. 2011;23(6):744–755. doi: 10.1016/j.ceb.2011.09.003. [DAZERT E, HALL M N. mTOR signaling in disease[J]. Curr Opin Cell Biol, 2011, 23(6):744-755.] [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
  • 13.HAY N, SONENBERG N. Upstream and downstream of mTOR. Genes Dev. 2004;18(16):1926–1945. doi: 10.1101/gad.1212704. [HAY N, SONENBERG N. Upstream and downstream of mTOR[J]. Genes Dev, 2004, 18(16):1926-1945.] [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
  • 14.YUN J, MULLARKY E, LU C, et al. Vitamin C selectively kills KRAS and BRAF mutant colorectal cancer cells by targeting GAPDH. Science. 2015;350(6266):1391–1396. doi: 10.1126/science.aaa5004. [YUN J, MULLARKY E, LU C, et al. Vitamin C selectively kills KRAS and BRAF mutant colorectal cancer cells by targeting GAPDH[J]. Science, 2015, 350(6266):1391-1396.] [DOI] [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]
  • 15.MA Y, CHAPMAN J, LEVINE M, et al. High-dose parenteral ascorbate enhanced chemosensitivity of ovarian cancer and reduced toxicity of chemotherapy. Sci Transl Med. 2014;6(222):222ra18. doi: 10.1126/scitranslmed.3007154. [MA Y, CHAPMAN J, LEVINE M, et al. High-dose parenteral ascorbate enhanced chemosensitivity of ovarian cancer and reduced toxicity of chemotherapy[J]. Sci Transl Med, 2014, 6(222):222ra18.] [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
  • 16.MONTI D A, MITCHELL E, BAZZAN A J, et al. Phase I evaluation of intravenous ascorbic acid in combination with gemcitabine and erlotinib in patients with metastatic pancreatic cancer[J/OL]. PLoS One, 2012, 7(1): e29794. https://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0029794. . [DOI] [PMC free article] [PubMed]
  • 17.YEOM C H, JUNG G C, SONG K J. Changes of terminal cancer patients' health-related quality of life after high dose vitamin C administration. J Korean Med Sci. 2007;22(1):7–11. doi: 10.3346/jkms.2007.22.1.7. [YEOM C H, JUNG G C, SONG K J. Changes of terminal cancer patients' health-related quality of life after high dose vitamin C administration[J]. J Korean Med Sci, 2007, 22(1):7-11.] [DOI] [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]
  • 18.CAMERON E, CAMPBELL A, JACK T. The orthomolecular treatment of cancer. Ⅲ. Reticulum cell sarcoma:double complete regression induced by high-dose ascorbic acid therapy. Chem Biol Interact. 1975;11(5):387–393. doi: 10.1016/0009-2797(75)90007-1. [CAMERON E, CAMPBELL A, JACK T. The orthomolecular treatment of cancer. Ⅲ. Reticulum cell sarcoma:double complete regression induced by high-dose ascorbic acid therapy[J]. Chem Biol Interact, 1975, 11(5):387-393.] [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
  • 19.CAMERON E, PAULING L. Supplemental ascorbate in the supportive treatment of cancer:reevaluation of prolongation of survival times in terminal human cancer. Proc Natl Acad Sci U S A. 1978;75(9):4538–4542. doi: 10.1073/pnas.75.9.4538. [CAMERON E, PAULING L. Supplemental ascorbate in the supportive treatment of cancer:reevaluation of prolongation of survival times in terminal human cancer[J]. Proc Natl Acad Sci U S A, 1978, 75(9):4538-4542.] [DOI] [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]
  • 20.MOERTEL C G, FLEMING T R, CREAGAN E T, et al. High-dose vitamin C versus placebo in the treatment of patients with advanced cancer who have had no prior chemotherapy. A randomized double-blind comparison. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/3880867. N Engl J Med. 1985;321(3):137–141. doi: 10.1056/NEJM198501173120301. [MOERTEL C G, FLEMING T R, CREAGAN E T, et al. High-dose vitamin C versus placebo in the treatment of patients with advanced cancer who have had no prior chemotherapy. A randomized double-blind comparison[J]. N Engl J Med, 1985, 312(3):137-141.] [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
  • 21.CREAGAN E T, MOERTEL C G, O'FALLON J R, et al. Failure of high-dose vitamin C (ascorbic acid) therapy to benefit patients with advanced cancer. A controlled trial. N Engl J Med. 1979;301(13):687–690. doi: 10.1056/NEJM197909273011303. [CREAGAN E T, MOERTEL C G, O'FALLON J R, et al. Failure of high-dose vitamin C (ascorbic acid) therapy to benefit patients with advanced cancer. A controlled trial[J]. N Engl J Med, 1979, 301(13):687-690.] [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
  • 22.SAXTON R A, SABATINI D M. mTOR signaling in growth, metabolism, and disease. http://d.old.wanfangdata.com.cn/OAPaper/oai_pubmedcentral.nih.gov_3414727. Cell. 2017;169(2):361–371. doi: 10.1016/j.cell.2017.03.035. [SAXTON R A, SABATINI D M. mTOR signaling in growth, metabolism, and disease[J]. Cell, 2017, 169(2):361-371.] [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
  • 23.LI H, LIU X, WANG Z, et al. MEN1/Menin regulates milk protein synthesis through mTOR signaling in mammary epithelial cells. Sci Rep. 2017;7(1):5479. doi: 10.1038/s41598-017-06054-w. [LI H, LIU X, WANG Z, et al. MEN1/Menin regulates milk protein synthesis through mTOR signaling in mammary epithelial cells[J]. Sci Rep, 2017, 7(1):5479.] [DOI] [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]
  • 24.KIM J, GUAN K L. mTOR as a central hub of nutrient signalling and cell growth. Nat Cell Biol. 2019;21(1):63–71. doi: 10.1038/s41556-018-0205-1. [KIM J, GUAN K L. mTOR as a central hub of nutrient signalling and cell growth[J]. Nat Cell Biol, 2019, 21(1):63-71.] [DOI] [PubMed] [Google Scholar]

Articles from Journal of Zhejiang University (Medical Sciences) are provided here courtesy of Zhejiang University Press

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